本文關(guān)鍵詞：環(huán)氧二十碳三烯酸對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的作用及機(jī)制　出處：《華中科技大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:探討花生四烯酸細(xì)胞色素P450表氧化酶代謝產(chǎn)物環(huán)氧二十碳三烯酸(Epoxyeicosatrienoic acids,EETs)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)的作用及機(jī)制。 方法:1、用10μM衣霉素(TM)誘導(dǎo)2h-11細(xì)胞和臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)產(chǎn)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,應(yīng)用Western Blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白p-PERK、Grp78、Xbp-1等水平的表達(dá)。 2、分別應(yīng)用50nM,250nM和1μM的三種EETs(8,9-EET、11,12-EET和14,15-EET)處理內(nèi)皮細(xì)胞,應(yīng)用Western Blot檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白p-PERK、Grp78、Xbp-1等的表達(dá)和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)促凋亡蛋白CHOP、p-c-Jun和有活性的caspase 12的表達(dá);應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡情況;應(yīng)用CCK-8檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞的活性。 3、用相關(guān)信號(hào)通路抑制劑(G蛋白、Gs蛋白、腺苷酸環(huán)化酶、蛋白激酶A、蛋白激酶G、PI3K、EGFR、MEK和PPAR-γ抑制劑)處理2h-11細(xì)胞和HUVECs,應(yīng)用Western Blot檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白Grp78的表達(dá)。 結(jié)果:1、Western Blot結(jié)果顯示,2h-11細(xì)胞在TM處理4h時(shí),內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白p-PERK、Grp78、Xbp-1等水平明顯增加。臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞在TM處理8h時(shí),p-PERK、Grp78、Xbp-1等水平明顯增加;有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 2、8,9-EET、11,12-EET和14,15-EET可以明顯減少TM誘導(dǎo)的2h-11細(xì)胞Grp78水平,且11,12-EET較其它兩種EETs,能明顯的減少p-PERK的水平。11,12-EET對(duì)Xbp-1和p-PERK的表達(dá)具有濃度依賴性。而14,15-EET與8,9-EET、11,12-EET和TM+DMSO相比,均能降低Grp78的表達(dá)水平,且14,15-EET對(duì)Xbp-1的表達(dá)具有濃度依賴性。流式細(xì)胞術(shù)和CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示:在2h-11細(xì)胞中,TM+DMSO組和TM+11,12-EET組的凋亡百分?jǐn)?shù)分別為:(35.210±2.887)%和(15.690±1.732)%,細(xì)胞的凋亡百分?jǐn)?shù)并增加細(xì)胞活性(P0.05);在HUVECs中,TM+DMSO組和TM+14,15-EET組的凋亡百分?jǐn)?shù)分別為:(41.673±3.756)%和(22.970±1.732)%,細(xì)胞活性分別為1.131±0.028和1.594±0.094,這表明,14,15-EET能明顯降低HUVECs的凋亡百分?jǐn)?shù)并增加細(xì)胞活性(P0.05)。 3、G蛋白抑制劑GDP-β-s、Gs蛋白抑制劑NF-449、腺苷酸環(huán)化酶(AC)抑制劑SQ22536、蛋白激酶A(PKA)抑制劑H-89和蛋白激酶G(PKG)抑制劑KT-5823與TM+EETs組相比,Grp78水平明顯增加(P0.05)。而EGFR、MEK、PI3K和PPAR-γ抑制劑與TM+EETs組相比,Grp78水平無(wú)明顯改變,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。 結(jié)論:1、外源性的EETs可以改善由衣霉素誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和細(xì)胞凋亡,并增加細(xì)胞的活性。 2、外源性的EETs改善由衣霉素誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的機(jī)制可能是通過(guò)G蛋白偶聯(lián)受體,進(jìn)而激活PKA和PKG。 3、外源性的EETs改善由衣霉素誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的機(jī)制可能不通過(guò)激活PI3K、EGFR、MEK和PPAR-γ。
[Abstract]:Objective: to investigate the metabolite of arachidonic acid cytochrome P450 epioxidase epoxide 20 carbotrienoic acid (Epoxyeicos atrienoic acids). The effect and mechanism of eETs on endoplasmic reticulum stress (Endoplasmic reticulum stress) in endothelial cells. Methods the endoplasmic reticulum (ER) stress was induced in 2h-11 cells and HUVECs by 10 渭 M TMM. The expression of cytoplasmic reticulum stress-related protein (p-PERKN) Grp78 (Xbp-1) was detected by Western Blot. 2. The endothelial cells were treated with 50nM 250nM and 1 渭 M EETs89-EET-1112-EET and 1415-EETs, respectively. Western Blot was used to detect the expression of the ER stress-related protein p-PERKN Grp78 Xbp-1 and the endoplasmic reticulum apoptotic protein (CHOP). The expression of p-c-Jun and active caspase 12; Apoptosis of endothelial cells was detected by flow cytometry. The activity of endothelial cells was detected by CCK-8. 3. The related signal pathway inhibitors (G protein G protein, adenylate cyclase, protein kinase A, protein kinase GN PI3K) EGFR were used. 2 h-11 cells and HUVECs were treated with MEK and PPAR- 緯 inhibitor. The expression of ER stress-related protein Grp78 was detected by Western Blot. Results the results of Western Blot showed that the endoplasmic reticulum stress-related protein p-PERKN Grp78 was treated with TM for 4 h. The level of Xbp-1 was significantly increased, and the level of p-PERKN Grp78 Xbp-1 was significantly increased at 8 h after TM treatment. There was significant statistical significance (P 0.05). The levels of Grp78 in 2h-11 cells induced by TM were significantly decreased by TM-induced Grp78 levels in 2h-11 cells. Compared with the other two EETs, 12-EET significantly reduced the level of p-PERK. 1112-EET was concentration-dependent on the expression of Xbp-1 and p-PERK. Compared with 89-EET-1112-EET and TM DMSO, 15-EET can decrease the expression of Grp78, and 14. The results of flow cytometry and CCK-8 analysis showed that in 2h-11 cells, TM DMSO and TM 11 were detected. The percentage of apoptosis in 12-EET group was 35.210 鹵2.887% and 15.690 鹵1.732%, respectively. The percentage of apoptosis and the activity of P0.05G were increased. TM DMSO group and TM 14 in HUVECs. The percentages of apoptosis in 15-EET group were 41.673 鹵3.756% and 22.970 鹵1.732%, respectively. The cell activity was 1.131 鹵0.028 and 1.594 鹵0.094, respectively, which indicated that the activity of Con 14 was 1. 131 鹵0. 028. 15-EET could significantly decrease the percentage of apoptosis of HUVECs and increase the activity of P0. 05%. 3, GDP- 尾 -songgs protein inhibitor NF-449, adenylate cyclase acid) inhibitor SQ22536. Protein kinase (PKA) inhibitor H-89 and protein kinase Gluten PKG inhibitor (KT-5823) were compared with TM EETs group. The level of Grp78 increased significantly (P 0.05), but the levels of PI3K and PPAR- 緯 inhibitor of EGFR EETs did not change significantly compared with those of TM EETs group. There was no statistical difference (P 0.05). Conclusion EETs can improve endoplasmic reticulum stress and apoptosis of endothelial cells induced by itamycin, and increase cell activity. 2. The mechanism of exogenous EETs in improving endoplasmic reticulum stress in endothelial cells induced by Ichlamycin may be the activation of PKA and PKG by G protein-coupled receptors. 3The mechanism of exogenous EETs in improving endoplasmic reticulum stress in endothelial cells induced by itamycin may not be mediated by activation of PI3KNEGFRMEK and PPAR- 緯.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R363

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1440328