本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用siRNA干擾技術(shù)沉默銅綠假單胞菌外排泵基因mexB的蛋白表達(dá)　出處：《華中科技大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： siRNA mexB基因 western blot 銅綠假單胞菌

【摘要】：目的： 觀察siRNA干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)入銅綠假單胞菌后， MexB蛋白表達(dá)量的變化。 方法： 針對mexB基因設(shè)計(jì)合成特異性siRNA分子，與pGPU6/GFP/Neo載體連接，構(gòu)建pGPU6/GFP/Neo-siRNA重組質(zhì)粒。構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET22b+/mexB，，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）plysS，誘導(dǎo)表達(dá)MexB蛋白，蛋白純化后免疫家兔制備多克隆抗體。siRNA質(zhì)粒分別電轉(zhuǎn)化銅綠假單胞菌野生株、臨床耐藥株及mexB基因高表達(dá)株，運(yùn)用western blot觀察轉(zhuǎn)化8h、12h、24h后，MexB蛋白表達(dá)量的變化。 結(jié)果： 成功構(gòu)建pGPU6/GFP/Neo-siRNA重組質(zhì)粒。成功表達(dá)銅綠假單胞菌外排泵蛋白MexB，并制備多克隆兔抗。siRNA質(zhì)粒對銅綠假單胞菌野生菌、臨床耐藥株及mexB基因高表達(dá)株的mexB基因均具有良好的沉默效果，而且沉默效果存在時(shí)間差異性。 結(jié)論： siRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)化三株銅綠假單胞菌后，在8h及12h時(shí)均可觀察到MexB蛋白表達(dá)量明顯減少，而在24h時(shí)MexB蛋白表達(dá)量無改變。其原因可能是由于細(xì)菌內(nèi)存在限制性核酸內(nèi)切酶，能降解異源DNA，這一機(jī)制可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)入細(xì)菌內(nèi)的siRNA重組質(zhì)粒被迅速降解，使基因沉默時(shí)間縮短。
[Abstract]:Objective: To observe the change of MexB protein expression after siRNA interference plasmid was transferred into Pseudomonas aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa). Methods: The specific siRNA molecule was designed and synthesized for mexB gene and was linked to pGPU6/GFP/Neo vector. Construction of pGPU6/GFP/Neo-siRNA recombinant plasmid, construction of recombinant expression plasmid pET22b / mexB, and transformation of Escherichia coli BL21(DE3)plysS. MexB protein was induced and purified and the polyclonal antibody. SiRNA plasmids were prepared by electrotransformation of Pseudomonas aeruginosa wild-strain, clinically resistant strain and high expression strain of mexB gene. Western blot was used to observe the expression of MexB protein. Results: The recombinant plasmid of pGPU6/GFP/Neo-siRNA was successfully constructed and the efflux pump protein MexB of Pseudomonas aeruginosa was successfully expressed. The polyclonal rabbit anti-. siRNA plasmid had good silencing effect on mexB gene of Pseudomonas aeruginosa, clinical resistant strain and high expression strain of mexB gene. And silence effect exists time difference. Conclusion: After three strains of Pseudomonas aeruginosa were transformed with siRNA plasmid, the expression of MexB protein was significantly decreased at 8h and 12h. However, the expression of MexB protein did not change at 24 h, which may be due to the existence of restriction endonuclease in bacteria, which can degrade heterologous DNA. This mechanism may lead to the rapid degradation of siRNA recombinant plasmid transformed into bacteria and shorten the gene silencing time.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R378.991;Q78

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 燕春艷;RNA干擾技術(shù)研究進(jìn)展[J];實(shí)用醫(yī)藥雜志;2003年09期

2 馬鵬鵬,葛曄華,郭睿,馬靜,陳平,薛社普,韓代書;小分子干擾RNA(siRNA)表達(dá)載體沉默靶基因的研究[J];解剖學(xué)報(bào);2004年06期

3 趙洪波,張嘉寧;RNA干擾技術(shù)的應(yīng)用[J];大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2003年04期

4 孟和,陳學(xué)輝,潘玉春;RNA干擾用siRNA的體外轉(zhuǎn)錄合成[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)科學(xué)版);2004年01期

5 范怡敏,耿飛,吳興中;RNAi的機(jī)制及RNAi技術(shù)的應(yīng)用[J];醫(yī)學(xué)綜述;2004年04期

6 張琴,趙勝,何凱;RNA干擾的研究現(xiàn)狀與展望[J];黃牛雜志;2004年05期

7 周幼芬,陳建偉,范挽亭,張昊昊,廖繼東,胡海燕;RNA干擾技術(shù)及其應(yīng)用[J];現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)生物工程學(xué)雜志;2004年05期

8 ;RNA干擾研究前沿和應(yīng)用領(lǐng)域[J];生命科學(xué)儀器;2004年02期

9 王菊萍,王瑩,霍艷英,郭藹光,張開泰;基于smad7基因?yàn)榘行蛄械腞NA干涉作用研究[J];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2004年04期

10 陳競;RNAi的研究進(jìn)展[J];川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2004年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 季愛民;蘇丹;車鷗;李文適;孫靚;張忠義;楊彬;;殼聚糖/siRNA納米粒介導(dǎo)的功能性基因沉默研究(英文)[A];2010年中國藥學(xué)大會(huì)暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

2 鄧清華;劉國文;劉磊;王建國;朱曉巖;李小兵;王哲;;siRNA特異性抑制犢牛原代肝細(xì)胞SREBP-1c基因的表達(dá)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜內(nèi)科學(xué)分會(huì)第七屆代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊）[C];2011年

3 陳衛(wèi)華;王躍閩;;Cb1-b特異性siRNA載體的篩選驗(yàn)證[A];華東六省一市泌尿外科學(xué)術(shù)年會(huì)暨2011年浙江省泌尿外科、男科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2011年

4 黃偉;呂明;金明姬;楊長青;高鐘鎬;;mPEG-PCL-g-PEI聚合物的合成及其siRNA遞送性能[A];2010年中國藥學(xué)大會(huì)暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

5 陳宇;鄭海濤;楊力建;陳少華;沈琦;劉思初;李

本文編號(hào)：1428832