本文關(guān)鍵詞：PGE2在BLM致大鼠肺纖維化模型中的變化及意義研究　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的：特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化（(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF）是一種病因不明的彌漫性肺疾病，以炎癥反應(yīng)、成纖維細(xì)胞增殖和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白沉積為特點(diǎn)，病因眾多復(fù)雜。多發(fā)病于50歲后。肺功能顯示限制性通氣功能障礙和重度的彌散功能障礙，血?dú)夥治鲲@示嚴(yán)重的低氧血癥，，且預(yù)后不良，患者最終多死于呼吸衰竭。其發(fā)病機(jī)制尚未明確，且無針對性的治療措施。目前的治療方法主要是應(yīng)用糖皮質(zhì)激素或聯(lián)合免疫抑制劑。療效不理想，毒副作用大。新的治療理念，方法及藥物顯得極為重要。人肺成纖維細(xì)胞的體外實(shí)驗(yàn)研究表明，前列腺素E2(PGE2)能抑制成纖維細(xì)胞的增殖分化，膠原的合成。且可對腫瘤壞死因子α（TNF-α），轉(zhuǎn)換生長因子-β（TGF-β）致炎致纖維化產(chǎn)生負(fù)性影響。 本實(shí)驗(yàn)旨在用塞來昔布抑制博來霉素致大鼠纖維化模型中的前列腺素的合成。通過觀察肺組織內(nèi)前列腺素E2分布，并間接量化其含量，以及測量肺泡灌洗液中環(huán)磷腺苷（CAMP） TNF-α的表達(dá)水平,并做相關(guān)統(tǒng)計(jì)分析，以觀察前列腺素E2（PGE2）在肺纖維化模型中的動態(tài)變化，給予16，16二甲基前列腺素E2干預(yù)，并測定上述指標(biāo)進(jìn)一步論證PGE2在肺纖維化中的作用和可能存在的機(jī)制。 方法：選取清潔級健康、雄性SD大鼠(河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供)120只，體重220±10g，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為4組對照組（NS組）：30只，氣管內(nèi)注入0.1ml/100g生理鹽水，之后第一天開始，用生理鹽水每日一次灌胃，同時用生理鹽水每日一次肌肉注射，分別于7、14、28天各處死10只。（2）模型組（BLM組）：30只，于氣管內(nèi)一次性注入博來霉素（5mg/kg），于造模后第一天開始給予生理鹽水每日灌胃一次，用生理鹽水每日肌肉注射一次。分別于7、14、28天處死。（3）塞來昔布（SL組）：30只，氣管內(nèi)一次性注入博來霉素（5mg/kg），于造模后第七日用塞來昔布溶液（塞來昔布與生理鹽水配成5%溶液）250mg/kg灌胃，1次/d，同時用生理鹽水0.1ml/200g每日一次肌肉注射。分別于7、14、28天處死。前六日均給予NS0.5ml/200g灌胃(4)16,16二甲基前列腺素E2組（PG組）氣管內(nèi)一次性注入博來霉素（5mg/kg），于造模后第一日起給予16,16二甲基前列腺素E2肌肉注射（100ug/kg.d），同時用生理鹽水0.5ml/200g每日一次灌胃。分別于7，14，28天處死。各組取右肺下葉固定于4%多聚甲醛溶液中，制作病理切片通過HE染色、Masson膠原染色來評價肺泡炎和肺纖維化的程度，并按照Szapiel法分為4級。用免疫組化法檢測PGE2，并用圖像分析系統(tǒng)半定量測定PGE2的平均積分光密度值，以此值來代替肺組織中PGE2的含量。右肺上葉制成勻漿測定肺組織中羥脯氨酸濃度，對左肺進(jìn)行肺泡灌洗，測定肺泡灌洗液中環(huán)磷腺苷（CAMP） TNF-α含量。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理并計(jì)較分析各組數(shù)據(jù)。 結(jié)果： 1肺組織病理分析結(jié)果：在同一時間點(diǎn)，BLM組肺泡炎高于NS（P0.05），BLM組纖維化程度各時間點(diǎn)亦顯著高于NS組（P0.05）。表明動物模型復(fù)制成功。SL組14,28天肺泡炎及纖維化程度均高于BLM組（p0.05）。7天時肺泡炎程度與BLM組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，纖維化程度較BLM組7天無統(tǒng)計(jì)差異，14天，28天時均高于BLM組（p0.05）。PG組各時間點(diǎn)肺泡炎及纖維化程度與BL組SL組均明顯減輕(P0.05)。 2肺組織羥脯氨酸（HYP）含量變化：BLM組大鼠肺組織勻漿中HYP含量隨著造模時間延長逐漸升高，于28天達(dá)高峰，與NS組比各時間點(diǎn)HYP含量均升高且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。SL組大鼠HYP含量隨時間延長呈增高趨勢，于28天達(dá)高峰。7天時與BLM組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，14天28天時均高于BLM組（p0.05）。PG組與BLM組SL組各時間點(diǎn)比較HYP含量均減低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）。 3肺組織中PGE2含量變化：SL組大鼠肺組織中PGE2含量表達(dá)14天28天時均低于BLM組（p0.05），7天時比較無統(tǒng)計(jì)差異。BLM組7天時與NS組比較是升高的，有統(tǒng)計(jì)差異（P0.05）。但14天28天時低于NS組（P0.05），由于PG組加入了活化的前列腺素E2衍生物16，16二甲基前列腺素E2，免疫組化顯示各時間點(diǎn)均高于BLM組（p0.05）。 4肺泡灌洗液中TNF-α，CAMP含量變化：BLM組各時間點(diǎn)與NS組比較TNF-α明顯增高（p0.05）.SL組大鼠肺組織中TNF-α表達(dá)量于14、28天均高于BLM組（p0.05），PG組與BLM組比較各時間點(diǎn)TNF-α的含量是降低的（p0.05）。7天時各組CAMP比較未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而于14天28天時BLM組顯著低于NS組（p0.05），SL組低于BLM組（p0.05）。PG組與BLM組比較14天28天時均升高（p0.05）。 結(jié)論： 1應(yīng)用博來霉素氣管內(nèi)給藥，可引起明顯的肺泡炎和肺纖維化，復(fù)制肺纖維化模型具有可行性。 2肺纖維化動物與正常動物比較在炎癥損傷期肺組織PGE2含量升高，而在纖維化形成過程中及纖維化后期肺組織中PGE2含量降低。纖維化肺組織肺泡灌洗液中CAMP含量降低，TNF-α含量是升高的。 3PGE2可能為纖維化保護(hù)因子。其抑制TNF-α的合成，增加CAMP的含量可能為其保護(hù)作用的重要機(jī)制。 4在早期肺泡炎程度無明顯差異的情況下，抑制PGE2合成可使肺纖維化加重，炎癥并非肺纖維化發(fā)生發(fā)展存在的充分必要條件，纖維化加重可獨(dú)立于炎癥情況改變而發(fā)生。 5應(yīng)用16，16二甲基前列腺素E2可減輕博來霉素所致的肺泡炎和纖維化程度。
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【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R563.9;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1428684