本文關(guān)鍵詞：以乙肝病毒核心蛋白為載體制備腸道病毒71型非結(jié)構(gòu)蛋白3D單克隆抗體　出處：《中國免疫學(xué)雜志》2017年09期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 乙肝病毒核心蛋白 腸道病毒型 非結(jié)構(gòu)蛋白D 單克隆抗體

【摘要】：目的:預(yù)測腸道病毒71型(EV71)非結(jié)構(gòu)蛋白3D的表位,以HBc蛋白為載體展示多肽,制備并鑒定抗EV71-3D的特異性單克隆抗體(m Ab)。方法:應(yīng)用生物信息學(xué)方法分析預(yù)測出EV71 3D蛋白親水性和免疫原性指數(shù)較高的多肽片段,并運(yùn)用HBc顆粒型蛋白載體展示肽段,構(gòu)建多肽融合蛋白,免疫BALB/c雌鼠,通過雜交瘤技術(shù)和親和層析技術(shù)制備和純化抗EV71-3D蛋白的特異性m Ab,用間接ELISA、ELISPOT、IFA和IHC對m Ab的性質(zhì)進(jìn)行初步鑒定。結(jié)果:構(gòu)建表達(dá)分別嵌合3D蛋白34~43位氨基酸殘基、61~76位氨基酸殘基、151~164位氨基酸殘基的HBc重組蛋白,免疫并經(jīng)過多輪克隆化篩選,獲得抗EV71-3D單克隆抗體3E1,其亞類為Ig G2a;免疫熒光試驗(yàn)、ELISPOT法和免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示其可與EV71特異性結(jié)合。結(jié)論:成功制備可特異性識別EV71的單克隆抗體3E1,為病毒的檢測及進(jìn)一步研究3D蛋白的功能奠定了基礎(chǔ),同時(shí)還驗(yàn)證了生物信息學(xué)技術(shù)與HBc顆粒型載體展示多肽技術(shù)相結(jié)合可快速高效地制備單克隆抗體。
[Abstract]:Objective: to predict the epitopes of enterovirus 71 (EV71) nonstructural protein 3D and display the polypeptide with HBc protein as vector. Preparation and Identification of specific Monoclonal Antibody against EV71-3D. Methods: bioinformatics was used to analyze and predict the polypeptide fragments with high hydrophilicity and immunogenicity index of EV71 3D protein. The peptide fusion protein was constructed by using HBc granule protein vector to immunize BALB/c female mice. The specific m-Abs of EV71-3D protein were prepared and purified by hybridoma and affinity chromatography, and indirect Elisa Elispot was used. IFA and IHC were used to identify the properties of mAbs. Results: the amino acid residues at position 3443 of chimeric 3D protein were constructed and expressed respectively. The recombinant HBc protein with amino acid residues at position 151C 164 was immunized and screened for multiple rounds of cloning. Monoclonal antibody 3E1 against EV71-3D was obtained and its subclass was Ig G2a. The results of ELISPOT and immunohistochemical staining showed that it could specifically bind to EV71. Conclusion: monoclonal antibody 3E1 which can specifically recognize EV71 was successfully prepared. It lays a foundation for the detection of virus and the further study of the function of 3D protein. It is also proved that the combination of bioinformatics and HBc granular vector display peptide technology can rapidly and efficiently prepare monoclonal antibodies.
【作者單位】： 廈門大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院分子疫苗學(xué)與分子診斷學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室國家傳染病診斷試劑與疫苗工程技術(shù)研究中心;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.31670933,No.81371817)資助
【分類號】：R392
【正文快照】： (1)本文受國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.31670933,No.81371817)資助。乙型肝炎病毒核心蛋白(Hepatitis B virus coreprotein,HBc)載體近年來運(yùn)用廣泛,可誘導(dǎo)產(chǎn)生強(qiáng)烈的B細(xì)胞反應(yīng)和T細(xì)胞反應(yīng),同時(shí)在體外能自發(fā)組裝成病毒樣顆粒(Virus-like particle,VLP)結(jié)構(gòu)[1,2]。研究表明其暴露

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