本文關(guān)鍵詞：siRNA干預(yù)樹突狀細(xì)胞CD40分子表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究　出處：《吉林大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：樹突狀細(xì)胞CD40是相對分子質(zhì)量為4800~50000的I型跨膜磷酸化的糖蛋白，其基因定位于20q11-20q13-2。是主要表達(dá)在B細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、DCs和少數(shù)成纖維細(xì)胞上的輔助信號分子，參與了細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)。其配體CD40L相對分子質(zhì)量約39000，為Ⅱ型跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，兩者同屬于TNF受體超家族成員，這一對受體 配體相互作用是免疫細(xì)胞間重要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。結(jié)合后可誘導(dǎo)各種淋巴細(xì)胞激活并產(chǎn)生各種促炎癥因子（如：IL-1、IL-2、IFN-γ和INF-α等），吸引白細(xì)胞血管外浸潤，引起局部組織損傷和功能障礙。研究表明CD40與CD40L協(xié)同刺激信號在免疫應(yīng)答的啟動和放大中起著重要作用，其與感染及免疫相關(guān)性疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。設(shè)計(jì)特異性分子去阻斷CD40或CD40L的相互作用，使T細(xì)胞產(chǎn)生免疫耐受，，B細(xì)胞分泌炎癥因子減少，阻止疾病發(fā)生、發(fā)展，特別是炎癥嚴(yán)重時(shí)作用尤為明顯。動物模型已經(jīng)得到證實(shí)，給予CD40L的抗體對有著自身免疫和炎癥疾病的小鼠有效，包括慢性膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎、肺炎、纖維變性、實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性腦脊髓炎、狼瘡腎炎、動脈粥樣硬化、急性胰腺炎及卵巢炎等；通過CD40L抗體在半抗原誘導(dǎo)的鼠結(jié)腸炎模型及其他實(shí)驗(yàn)性和感染后結(jié)腸炎模型中均能證實(shí)CD40/CD40L系統(tǒng)在炎癥性腸�。↖BD）發(fā)生發(fā)展中重要性。RNA干預(yù)（RNA-mediated interference，RNAi）在疾病治療中的應(yīng)用是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)之一。其基本原理為被特異地切割成為長度為19~21nt的小干擾RNA （small interfering RNA，siRNA），可作為導(dǎo)向序列，引導(dǎo)其反應(yīng)與單鏈靶mRNA結(jié)合，共同形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物（RNAinduced silencing complex，RNSC）。目前RNAi技術(shù)的研究日趨深入，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用的非常廣泛，包括抗病毒、腫瘤的治療及神經(jīng)變性性疾病的治療上都取得了較好的效果。然而應(yīng)用siRNA干預(yù)樹突狀細(xì)胞CD40分子表達(dá)治療炎癥性腸的相關(guān)報(bào)道較少。本研究將設(shè)計(jì)好的針對CD40分子正義及反義RNAi片段與pSilencer連接，構(gòu)建表達(dá)載體，經(jīng)DH5α擴(kuò)增后測序證明為pSilencer-P450-CD40RNAi，，再轉(zhuǎn)染SD大鼠DC，通過蛋白免疫印記、PCR等方法，測定大鼠DC表面CD40分子及CD40mRNA的表達(dá)水平，結(jié)果顯示干預(yù)組明顯降低樹突狀細(xì)胞中CD40分子的蛋白表達(dá)，灰度掃描結(jié)果抑制率達(dá)60％；CD40分子的mRNA表達(dá)量下調(diào)了57.21％，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。這一結(jié)果為IBD RNA干預(yù)治療的動物實(shí)驗(yàn)及臨床應(yīng)用奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
[Abstract]:鏍?wèi)绐佺姸缁嗚優(yōu)CD40鏄浉瀵瑰垎瀛愯川閲忎負(fù)4800~50000鐨処鍨嬭法鑶滅７閰稿寲鐨勭硸铔嬬櫧,鍏跺熀鍥犲畾浣嶄簬20q11-20q13-2.鏄富瑕佽〃杈懼湪B緇嗚優(yōu),鍗曟牳宸ㄥ櫖緇嗚優(yōu),DCs鍜屽皯鏁版垚綰ょ淮緇嗚優(yōu)涓婄殑杈呭姪淇″彿鍒嗗瓙,鍙備笌浜嗙粏鑳?yōu)鍜屼綋娑插厤鐤弽搴?鍏墮厤浣揅D40L鐩稿鍒嗗瓙璐ㄩ噺綰

本文編號：1424448