本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌CFP10-PPE68融合蛋白表達及其在結(jié)核病診斷中的初步應(yīng)用　出處：《重慶醫(yī)科大學》2012年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的： 構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌CFP10-PPE68融合基因原核表達質(zhì)粒，在大腸桿菌BL21中觀察CFP10-PPE68融合基因的表達，并用親和層析法分離純化重組蛋白；用純化的CFP10-PPE68重組蛋白作為診斷抗原，間接ELISA法檢測臨床診斷為肺結(jié)核病人和肺外結(jié)核病人血清標本中相應(yīng)抗體，并判斷其特異性、敏感性和準確性。為結(jié)核病的早期診斷提供新的思路。 方法： 1.以結(jié)核分枝桿菌H37Rv基因組DNA為模板，用PCR方法分別擴增CFP10和PPE68基因，然后用基因拼接法擴增CFP10-PPE68融合基因，，將其克隆至pET32a(+)載體中，構(gòu)建重組的原核表達質(zhì)粒pET32a(+)/CFP10-PPE68，轉(zhuǎn)化至E.coli BL21中，經(jīng)IPTG誘導表達后，對表達產(chǎn)物進行鑒定。 2.將純化的CFP10-PPE68重組蛋白作為診斷抗原，間接ELISA法檢測臨床診斷為肺結(jié)核病人（251例）、肺外結(jié)核病人（66例）和健康體檢者（52例）共369例血清標本中相應(yīng)抗體，并判斷其特異性、敏感性和準確性。 結(jié)果： 1．重組的原核表達質(zhì)粒pET32a(+)/CFP10-PPE68雙向測序結(jié)果顯示與CFP10-PPE68基因編碼序列完全一致，表達產(chǎn)物可見相對分子質(zhì)量約68000的蛋白條帶，為CFP10（相對分子質(zhì)量10900）、PPE68(相對分子質(zhì)量37330)與Trx-His(相對分子質(zhì)量20400)的融合蛋白條帶。 2.CFP10-PPE68重組蛋白作為診斷抗原，以臨床診斷為金標準，52例健康體檢者為陰性對照，檢測肺結(jié)核病人和肺外結(jié)核病人結(jié)核分枝桿菌感染的敏感性分別為98.4%，98.3%，特異性分別為27.6%，85.0%，準確性分別為56.1%，91.5%。 結(jié)論： 1.成功的將結(jié)核分枝桿菌特異性基因CFP10、PPE68融合克隆入原核表達質(zhì)粒pET32a(+)中，并在E.coli BL21中成功表達。 2.CFP10-PPE68蛋白作為診斷抗原，診斷結(jié)核分枝桿菌感染，特別是對難以診斷的肺外結(jié)核病診斷有一定參考價值。
[Abstract]:Objective:
The construction of Mycobacterium tuberculosis CFP10-PPE68 fusion gene prokaryotic expression plasmid, observe the expression of CFP10-PPE68 fusion gene in Escherichia coli BL21, and purification of recombinant protein by affinity chromatography; the purified CFP10-PPE68 recombinant protein as antigen, clinical diagnosis and detection of indirect ELISA method for the corresponding antibodies in patients with serum samples in patients with pulmonary tuberculosis and pulmonary tuberculosis. And determine its specificity, sensitivity and accuracy. Provide a new method for the early diagnosis of tuberculosis.
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本文編號：1424330