發(fā)布時(shí)間：2018-01-14 13:22

  本文關(guān)鍵詞：Ⅰ、Ⅱ型膠原蛋白對人軟骨細(xì)胞生物學(xué)特性的影響　出處：《川北醫(yī)學(xué)院》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的：通過觀察三種培養(yǎng)板中人軟骨細(xì)胞的生物學(xué)特性，了解Ⅰ、Ⅱ型膠原蛋白對體外培養(yǎng)的人軟骨細(xì)胞的生物學(xué)特性的影響。 方法：軟骨組織標(biāo)本來自于川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院骨科，因股骨頸骨折行全髖置換術(shù)的患者。在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過Ⅱ型膠原酶一步消化法處理關(guān)節(jié)軟骨后進(jìn)行體外單層培養(yǎng)獲得大量軟骨細(xì)胞，經(jīng)過3個(gè)月軟骨細(xì)胞培養(yǎng)傳代至第7代，記為P0—P7，相差光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，選擇第三代軟骨細(xì)胞進(jìn)行研究。細(xì)胞計(jì)數(shù)后分別加入普通培養(yǎng)板（普通板），Ⅰ型膠原蛋白包被的培養(yǎng)板（Ⅰ型）、Ⅱ型膠原蛋白包被培養(yǎng)板（Ⅱ型）繼續(xù)培養(yǎng)。通過評價(jià)細(xì)胞活性、倍增時(shí)間、相差光鏡觀察細(xì)胞形態(tài)來分析細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果，通過ELISA技術(shù)、甲苯胺藍(lán)染色來鑒定軟骨細(xì)胞表型，PCR技術(shù)、糖胺多糖定量檢測來了解軟骨細(xì)胞在三種培養(yǎng)板中分化增殖能力。 結(jié)果：(1)收集20例符合標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)節(jié)軟骨標(biāo)本，選擇培養(yǎng)后細(xì)胞形態(tài)正常、活性強(qiáng)的10組軟骨細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)。（2）從倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，剛消化好未貼壁軟骨細(xì)胞呈圓形，貼壁后細(xì)胞大小變化不大呈多角形。傳代后，細(xì)胞逐漸伸長，變大，隨著傳代數(shù)增加，細(xì)胞逐漸呈長梭形，，類似成纖維細(xì)胞，前三代軟骨細(xì)胞具有明顯增殖活性，細(xì)胞形態(tài)相似，從第4代開始逐漸變?yōu)殚L梭形，到第7代，軟骨細(xì)胞完成變?yōu)槌衫w維細(xì)胞。（3）將第3代軟骨細(xì)胞分別加入Ⅰ型、Ⅱ型和普通板后繼續(xù)培養(yǎng)7天后觀察，發(fā)現(xiàn)Ⅱ型中軟骨細(xì)胞數(shù)量最多，且增殖速度為Ⅰ型的2倍，普通板的5倍，該結(jié)果提示其增殖速度較快。檢測三種不同培養(yǎng)板中軟骨細(xì)胞分泌Ⅰ、Ⅱ型膠原蛋白的量，發(fā)現(xiàn)Ⅱ型中軟骨細(xì)胞分泌Ⅰ型膠原蛋白最少，且與普通板檢測結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01），而與Ⅰ型板檢測結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Ⅱ型板中軟骨細(xì)胞分泌Ⅱ型膠原蛋白量最多，與其他兩種培養(yǎng)板檢測結(jié)果的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）；甲苯胺藍(lán)染色及DMMB比色法定量檢測軟骨細(xì)胞分泌糖胺多糖的量，發(fā)現(xiàn)Ⅱ型板上軟骨細(xì)胞分泌糖胺多糖最多，與Ⅰ型板、普通板檢測結(jié)果差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）。上述結(jié)果均提示Ⅱ型板中軟骨細(xì)胞分裂增殖能力較強(qiáng)。 結(jié)論： 1本研究發(fā)現(xiàn)使用DMEM配置膠原酶，采用Ⅱ型膠原酶一步消化法并且分次收集軟骨細(xì)胞，可以減少消化酶對軟骨細(xì)胞的毒性，保持細(xì)胞活力。 2.膠原蛋白和軟骨細(xì)胞有交互作用，膠原蛋白包被的培養(yǎng)板應(yīng)用于原代軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)能使細(xì)胞盡早貼壁，減少懸浮死細(xì)胞量。 3.膠原蛋白包被的培養(yǎng)板培養(yǎng)軟骨細(xì)胞優(yōu)于普通培養(yǎng)板，其中Ⅱ型膠原蛋白包被的培養(yǎng)板在培養(yǎng)軟骨細(xì)胞時(shí)更能維持細(xì)胞形態(tài)，延長去分化現(xiàn)象出現(xiàn)的時(shí)間，更有使細(xì)胞再分化的能力。
[Abstract]:Aim: to observe the biological characteristics of human chondrocytes in three culture plates and to investigate the effects of collagen 鈪

本文編號：1423756