本文關(guān)鍵詞：Cr（Ⅵ）對L-02肝細(xì)胞線粒體呼吸鏈復(fù)合體的影響　出處：《中南大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的： 探討Cr(VI)對L-02肝細(xì)胞線粒體DNA編碼呼吸鏈復(fù)合體亞基基因的表達(dá)水平、呼吸鏈復(fù)合體活性與能量代謝的影響以及它們的相互聯(lián)系,為進(jìn)一步探索Cr(VI)所致線粒體能量代謝障礙的分子機(jī)制提供實驗依據(jù)。 方法： 用不同濃度Cr(VI)(0、2、4、8、16、32、64、128μmol/L)分別處理體外培養(yǎng)的人胚L-02肝細(xì)胞24h后,通過MTT試驗檢測不同濃度Cr(VI)對L-02肝細(xì)胞存活率的影響,選擇低、中、高3個Cr(VI)處理濃度,即2、8、32μmol/L進(jìn)行后續(xù)實驗,處理時間為24h。用細(xì)胞總RNA提取試劑盒分離肝細(xì)胞總RNA,線粒體ND1、ND2、Cytb、 COXⅠ-Ⅲ、ATPase6和ATPase8基因表達(dá)水平用逆轉(zhuǎn)錄-熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)測定；細(xì)胞ATP含量、線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ-V活性與細(xì)胞ROS含量分別用化學(xué)發(fā)光法、紫外分光光度法和熒光分光光度法檢測。 結(jié)果： 1.Cr(Ⅵ)引起L-02肝細(xì)胞生存率降低：Cr(Ⅵ)在2-128gmol/L濃度范圍內(nèi),可引起肝細(xì)胞存活率顯著降低(P0.05)。Cr(Ⅵ)對細(xì)胞生存率的影響表現(xiàn)出明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系,肝細(xì)胞生存率與Cr(Ⅵ)處理濃度呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.888,P0.05)。 2.Cr(Ⅵ)誘導(dǎo)肝細(xì)胞ROS生成增多：各Cr(Ⅵ)處理組肝細(xì)胞內(nèi)ROS含量增高,其中8、32μmol/LCr(Ⅵ)處理組與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義P0.05)。Cr(Ⅵ)處理濃度與肝細(xì)胞內(nèi)ROS水平之間存在明顯正相關(guān)關(guān)系(r=0.993,P0.05)。 3. Cr(Ⅵ)對線粒體DNA基因表達(dá)的影響2μmol/LCr(Ⅵ)可增強(qiáng)Ctyb、ATPase6和ATPase8基因的表達(dá),下調(diào)ND2基因表達(dá)P0.05)；8μmol/LCr(Ⅵ)上調(diào)ND1、ND2、Cytb、COX Ⅰ和COXⅢ基因的表達(dá),而引起ATPase6和ATPase8基因表達(dá)減弱(P0.05)；32μmol/LCr(Ⅵ)可引起ND1、ND2、COX Ⅰ-Ⅲ基因表達(dá)增強(qiáng),而使ATPase6和ATPase8基因表達(dá)下降(P0.05)。 4. Cr(Ⅵ)對呼吸鏈復(fù)合體活性的影響：2、8、32μmo1/LCr(Ⅵ)染毒處理,均可使呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ活性顯著下降(P0.05)；各Cr(Ⅵ)處理組復(fù)合體Ⅱ活性的降低與對照組相比沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 5. Cr(Ⅵ)對肝細(xì)胞內(nèi)ATP含量的影響：與對照組相比,各濃度Cr(Ⅵ)處理組肝細(xì)胞內(nèi)ATP含量均顯著降低(P0.05)。 結(jié)論： Cr(Ⅵ)引發(fā)的肝細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生與線粒體DNA編碼的呼吸鏈復(fù)合體亞基基因表達(dá)改變有關(guān)。線粒體DNA中呼吸鏈復(fù)合體亞基編碼基因的表達(dá)水平與復(fù)合體Ⅰ-Ⅴ活性關(guān)系密切。線粒體DNA基因表達(dá)水平改變,導(dǎo)致線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ-Ⅴ活性下降,可能是Cr(Ⅵ)誘導(dǎo)肝細(xì)胞線粒體能量代謝障礙的原因之一。
[Abstract]:Objective: To investigate the expression level of mitochondrial DNA coding respiratory chain complex subunit gene in L-02 hepatocytes, the effects of CrVI on the activity of respiratory chain complex and energy metabolism, and their correlation. It provides experimental basis for further exploring the molecular mechanism of mitochondrial energy metabolism disorder induced by CrVI. Methods: Human embryo L-02 hepatocytes were cultured in vitro for 24 hours. The survival rate of L-02 hepatocytes was determined by MTT test. 32 渭 mol/L was followed up for 24 h. Total RNA was isolated from hepatocytes with total RNA extraction kit, mitochondrial ND1, ND2Cytb, COX 鈪，

本文編號：1422430