本文關(guān)鍵詞：大腸不耐熱腸毒素B亞單位佐劑活性相關(guān)蛋白的篩選　出處：《中國藥理學(xué)通報》2016年12期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的通過對大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位相互作用蛋白的分析,探討LTB佐劑活性的分子機制。方法純化的LTB蛋白和生理鹽水分別處理RAW 264.7細胞,pulldown實驗分離與LTB有相互作用的蛋白分子,質(zhì)譜鑒定這些相互作用蛋白;免疫熒光和Western blot分析驗證與LTB相互作用蛋白在細胞內(nèi)的相互作用。結(jié)果通過質(zhì)譜鑒定了25種可能與LTB存在相互作用的蛋白分子,并構(gòu)建了其相互作用網(wǎng)絡(luò)圖,篩選出可能與LTB免疫調(diào)節(jié)作用相關(guān)的蛋白分子;免疫熒光結(jié)果顯示神經(jīng)節(jié)苷脂能阻斷LTB進入RAW 264.7細胞內(nèi),LTB在細胞內(nèi)與GM130存在相互作用,而Vimentin在生理狀態(tài)下與LTB不存在相互作用;LTB處理RAW 264.7細胞12 h后,β-actin表達上調(diào),Hspd1表達無變化。結(jié)論 LTB佐劑活性的發(fā)揮是通過與免疫細胞表面GM1結(jié)合,引起內(nèi)吞,并以小泡的形式到達高爾基體,通過高爾基體的加工。最終通過與Jup結(jié)合進而作用于TCF/LEF,引起B(yǎng)cl-2、IL-6、Runx3等基因表達的變化,發(fā)揮促進T細胞和B細胞的增殖分化及活化、分泌細胞因子及免疫球蛋白的作用。
[Abstract]:Objective through the analysis of the Escherichia coli heat labile toxin B subunit interacting protein, to explore the molecular mechanism of LTB adjuvant activity. LTB protein and saline purification methods were treated RAW 264.7 cells, the protein molecules separation and LTB pulldown interaction, mass spectrometry identification of these interacting proteins; immunofluorescence and Western blot interaction analysis verify the interaction between LTB and protein in the cells. Results by mass spectrometry identified 25 possible protein interactions with LTB, and construct the interaction network graph, and to identify the possible immunomodulatory protein molecules related to LTB; immunofluorescence results showed that gangliosides can block LTB enter the RAW 264.7 cells, LTB interacts with GM130 in cells, and Vimentin in physiological condition and there is no LTB interaction; LTB RAW 264.7 cells 12 After h, upregulate the expression of beta -actin, Hspd1 showed no changes. Conclusion LTB play adjuvant activity is through a combination of GM1 and immune cells, caused by endocytosis, and in vesicles to the Golgi, through the Golgi processing. Eventually combined with Jup's influence on TCF/LEF, IL-6, Bcl-2 induced changes in expression Runx3 gene of T cells and promote the proliferation of B cell differentiation and activation, cytokine secretion and immune globulin.

【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)分子醫(yī)學(xué)與腫瘤研究中心生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(No 30972585)
【分類號】：R329-33
【正文快照】： R378.21;R977.6大腸桿菌不耐熱腸毒素由產(chǎn)毒型大腸埃希菌(ETEC)產(chǎn)生,因其不耐熱,在60℃處理30 min即被破壞,故稱作不耐熱腸毒素(LT)[1-2]。LT是一類六聚體大分子,由1個A亞基(LTA)和5個B亞基(LTB)組成,結(jié)構(gòu)和功能與霍亂毒素相似[3]。LTB作為LT的非毒性亞基,能刺激機體產(chǎn)生強烈

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本文編號：1419371