本文關(guān)鍵詞：人精子甘露糖受體不同探針標(biāo)記的比較研究　出處：《福建醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：人類生殖調(diào)控是生命科學(xué)的重要研究領(lǐng)域。其中精子與卵子結(jié)合的受精過(guò)程是備受矚目的研究熱點(diǎn)。受精過(guò)程是一個(gè)由許多分子參與的多步驟復(fù)雜過(guò)程,其分子機(jī)制至今尚未得到完全闡明。在參與受精過(guò)程的分子中,人精子甘露糖受體(human sperm Mannose receptor,hsMR)可能是人精子與卵母細(xì)胞識(shí)別、結(jié)合和融合等環(huán)節(jié)密切相關(guān)的分子,值得特別關(guān)注。 目前已經(jīng)對(duì)hsMR的分布、生化特性及生理功能等方面進(jìn)行了研究。但是對(duì)hsMR的定性還不明確,關(guān)于hsMR分子量的描述也不同,從27KDa到160KDa不等。已知hsMR是人精子中一種可以識(shí)別并結(jié)合甘露糖的分子,并與精卵相互作用有一定關(guān)系。近年還有個(gè)別研究認(rèn)為hsMR可能就是人巨噬細(xì)胞甘露糖受體(Human macrophage Mannose receptor, hmMR,,又稱CD206),并在介導(dǎo)HIV-1病毒的傳播中可能起一定作用。但從進(jìn)化角度來(lái)看,精子中的甘露糖受體的存在不可能僅為介導(dǎo)病毒的傳播,很可能與受精或其它生理功能有關(guān)。hsMR是否就是CD206?不同分子量的候選分子與精子的不同生理狀態(tài)是否有關(guān)?目前尚不明了。因此,本研究對(duì)不同生理狀態(tài)的精子,分別采用D-甘露糖基化白蛋白(D-Mannosylated albumin,DMA)和抗CD-206抗體(anti-CD206)為探針,運(yùn)用蛋白質(zhì)斑點(diǎn)雜交實(shí)驗(yàn)、SDS-PAGE電泳、蛋白質(zhì)免疫印跡雜交實(shí)驗(yàn)、熒光免疫細(xì)胞化學(xué)、親和層析和Pull-Down分離和質(zhì)譜分析等實(shí)驗(yàn),了解靶分子的分子屬性,以便進(jìn)一步揭示人精子中甘露糖受體的本質(zhì)特征。 結(jié)果顯示,斑點(diǎn)雜交的試驗(yàn)證明,DMA探針和anti-CD206抗體分別與Con A或CD206斑點(diǎn)特異性地結(jié)合。用異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的不同探針對(duì)誘導(dǎo)頂體反應(yīng)的精子進(jìn)行熒光標(biāo)記,并通過(guò)熒光顯微鏡觀察,結(jié)果顯示DMA-FITC標(biāo)記的精子赤道段或頂體區(qū)有典型的熒光,而用抗CD206抗體-FITC探針則觀察不到典型的熒光。新鮮精液中的精子頭、尾均存在甘露糖結(jié)合蛋白,隨著獲能進(jìn)展,尾部的結(jié)合活性顯著降低。蛋白質(zhì)免疫印跡雜交結(jié)果顯示人獲能精子萃取液在72KDa處有一條明顯的條帶能與DMA特異結(jié)合,但并不與CD206抗體結(jié)合。說(shuō)明精子萃取液中含有能與甘露糖結(jié)合的分子,但可能不存在與人巨噬細(xì)胞甘露糖受體同源的成分。 綜上所述,得出以下結(jié)論: 1.人精子中具有與甘露糖結(jié)合活性的蛋白有兩種,分子量分別為27Kda和72Kda; 2. 27Kda蛋白(SAP)可能是男性生殖道分泌的精漿蛋白吸附在精子表面(尤其是尾部)的產(chǎn)物,而72Kda蛋白則可能是精子頂體反應(yīng)后才暴露到赤道帶并可能在精子-卵母細(xì)胞相互識(shí)別-結(jié)合中其介導(dǎo)作用的人精子甘露糖受體hsMR。 3.人精子細(xì)胞中不存在與人巨噬細(xì)胞甘露糖受體(CD206)相同的分子。
[Abstract]:Human reproductive regulation is an important research field in life sciences , in which the fertilization of sperm and ovum is a hot spot . The fertilization process is a multi - step complex process involving many molecules . The molecular mechanism has not yet been fully elucidated . In the molecule involved in the fertilization process , human sperm Mannose receptor ( hsMR ) may be a molecule closely related to the identification , binding and fusion of human sperm and oocyte , and deserves special attention . In recent years , it is suggested that hsMR may be human macrophage Mannose receptor ( hmMR , also known as CD206 ) , and it may play a role in mediating the transmission of HIV - 1 virus . The results showed that both DMA probe and anti - CD206 antibody were specifically combined with Con A or CD206 spots . In conclusion , the following conclusions are drawn : 1 . There are two proteins with mannose binding activity in human sperm , and the molecular weights are 27Kda and 72Kda , respectively . 2.27Kda protein ( SAP ) may be a product of a seminal plasma protein secreted by a male reproductive tract on the surface of the sperm ( especially the tail ) , while the 72Kda protein may be a human sperm mannose receptor hsMR that is exposed to the equatorial belt after the sperm acrosome reaction and possibly in the sperm - oocyte recognition - binding . 3 . The human sperm cells do not present the same molecules as human macrophage mannose receptors ( CD206 ) .

【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R321

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