本文關(guān)鍵詞：鮑曼不動(dòng)桿菌外膜蛋白34的表達(dá)純化及其生物活性分析　出處：《生物技術(shù)通報(bào)》2017年07期 　論文類(lèi)型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 鮑曼不動(dòng)桿菌 外膜蛋白 包涵體 圓二色譜 凋亡

【摘要】：通過(guò)基因克隆方法制備鮑曼不動(dòng)桿菌ATCC 19606(Acinetobacter baumannii ATCC 19606)外膜蛋白34(Outer membrance protein 34,Omp34),并分析其生物結(jié)構(gòu)及對(duì)HEK293細(xì)胞的凋亡作用。采用PCR方法擴(kuò)增鮑曼不動(dòng)桿菌ATCC19606Omp34基因,并將其克隆到表達(dá)載體p ET28a(+)以構(gòu)建重組質(zhì)粒pET28a(+)-Omp34,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,IPTG誘導(dǎo)蛋白表達(dá)并用鎳柱親和層析純化蛋白,使用L-精氨酸和還原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)可使Omp34蛋白正確復(fù)性,生物信息預(yù)測(cè)Omp34生物結(jié)構(gòu),利用圓二色譜(Circular dichroism CD)技術(shù)測(cè)定Omp34的二級(jí)結(jié)構(gòu),通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)和Western blot檢測(cè)Omp34對(duì)HEK293細(xì)胞的凋亡作用。成功構(gòu)建表達(dá)載體p ET28a(+)-Omp34,并在原核表達(dá)體系中高效表達(dá),通過(guò)復(fù)性得到可溶蛋白。生物信息預(yù)測(cè)Omp34為β桶狀蛋白,圓二色譜證實(shí)Omp34結(jié)構(gòu)為β折疊結(jié)構(gòu),其中α-螺旋含量為12%、β-折疊為39%、β-轉(zhuǎn)角為22%、無(wú)規(guī)則卷曲為27%。復(fù)性的Omp34可使HEK293細(xì)胞發(fā)生凋亡。通過(guò)分子克隆技術(shù)成功獲得了鮑曼不動(dòng)桿菌外膜蛋白34,并解析出其二級(jí)結(jié)構(gòu),證實(shí)其可以導(dǎo)致HEK293細(xì)胞凋亡,這為將來(lái)進(jìn)一步研究鮑曼不動(dòng)桿菌外膜蛋白34的生物學(xué)功能及其耐藥機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Preparation of Acinetobacter baumannii ATCC 19606 from Acinetobacter baumannii of Acinetobacter baumannii by Gene cloning. Outer membrance protein 34. Omp34, and its biological structure and apoptosis on HEK293 cells were analyzed. The ATCC19606Omp34 gene of Acinetobacter baumannii was amplified by PCR. It was cloned into the expression vector pET28a() to construct the recombinant plasmid pET28a( pET28a- Omp34) and transformed into Escherichia coli BL21. IPTG induced protein expression was purified by nickel affinity chromatography and Omp34 protein was renatured correctly by using L- arginine and reduced glutathione / oxidized glutathione. Biological information was used to predict the biological structure of Omp34 and the secondary structure of Omp34 was determined by circular dichroism (CD) technique. The apoptotic effect of Omp34 on HEK293 cells was detected by flow cytometry and Western blot. The expression vector pET28a (pET28a- Omp34) was successfully constructed. In prokaryotic expression system, soluble protein was obtained by renaturation. Bioinformatics predicted that Omp34 was 尾 -bucket protein, and circular dichroism (CD _ 2) confirmed that Omp34 structure was 尾 -fold structure. The content of 偽-helix is 12, 尾-fold is 39 and 尾-turn angle is 22%. Omp34 can induce apoptosis of HEK293 cells. Acinetobacter baumannii outer membrane protein 34 was successfully obtained by molecular cloning and its secondary structure was analyzed. It is confirmed that it can induce apoptosis of HEK293 cells, which lays a foundation for further study on the biological function and drug resistance mechanism of Acinetobacter baumannii outer membrane protein 34.
【作者單位】： 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心;
【分類(lèi)號(hào)】：R378
【正文快照】： 鮑曼不動(dòng)桿菌是一種非發(fā)酵的革蘭氏陰性的機(jī)會(huì)致病菌,可以引起呼吸機(jī)相關(guān)肺炎、敗血癥、泌尿系感染、腦膜炎等疾病,它可以造成嚴(yán)重的免疫系統(tǒng)損害,是醫(yī)院獲得性感染的重要致病菌[1]。近年來(lái)由于抗生素的濫用,鮑曼不動(dòng)桿菌的抗生素耐藥問(wèn)題已經(jīng)日漸突出,臨床出現(xiàn)大量多耐藥菌株

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 倫浩;吳敏芝;司徒冰;;2007-2008年廣州某院肺部鮑曼不動(dòng)桿菌感染危險(xiǎn)因素分析[J];藥學(xué)與臨床研究;2010年05期

2 朱麗莎;王鳳玲;杜昆;艾彪;;鮑曼不動(dòng)桿菌在醫(yī)院環(huán)境中的分布情況調(diào)查[J];海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年09期

3 王婷;;重癥監(jiān)護(hù)室感染鮑曼不動(dòng)桿菌的原因分析及護(hù)理對(duì)策[J];護(hù)理實(shí)踐與研究;2011年24期

4 王炯;湯懿珍;;50例肺部鮑曼不動(dòng)桿菌感染臨床分析[J];臨床肺科雜志;2012年06期

5 劉敏龍;王國(guó)恩;王紅梅;;西安某三甲醫(yī)院鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥調(diào)查和治療策略[J];中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥;2012年17期

6 陳佰義;何禮賢;胡必杰;倪語(yǔ)星;邱海波;石巖;施毅;王輝;王明貴;楊毅;張菁;俞云松;;中國(guó)鮑曼不動(dòng)桿菌感染診治與防控專(zhuān)家共識(shí)[J];中國(guó)醫(yī)藥科學(xué);2012年08期

7 劉瓊慧;吳梅芳;黃春燕;;鮑曼不動(dòng)桿菌肺部感染病人的護(hù)理與預(yù)防[J];全科護(hù)理;2012年29期

8 吳天清;王家珍;應(yīng)軍;蔣莉;;縣級(jí)醫(yī)院綜合ICU多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌感染的防治策略[J];中國(guó)醫(yī)藥指南;2012年27期

9 劉偉萍;崔小梅;;老年住院患者鮑曼不動(dòng)桿菌感染的臨床分析及護(hù)理[J];護(hù)理實(shí)踐與研究;2012年24期

10 楊建瓊;;三級(jí)縣級(jí)醫(yī)院鮑曼不動(dòng)桿菌的感染狀況[J];中外醫(yī)學(xué)研究;2012年35期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 楊培洪;凌保東;;多重PCR技術(shù)在檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌β-內(nèi)酰胺酶基因中的應(yīng)用[A];第十屆全國(guó)化療藥理暨抗感染藥理高峰論壇資料匯編[C];2010年

2 王芳;易濱;涂顯春;雷紅;孫敏霞;劉軍;趙曉曉;;鮑曼不動(dòng)桿菌快速檢測(cè)方法的建立和應(yīng)用[A];中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)第十八屆全國(guó)醫(yī)院感染管理學(xué)術(shù)年會(huì)論文資料匯編[C];2011年

3 薛寶升;;鮑曼不動(dòng)桿菌感染[A];第六屆全國(guó)燒傷救治專(zhuān)題研討會(huì)論文匯編[C];2009年

4 劉嘉琳;于沁;瞿洪平;;多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌防控及抗生素優(yōu)化方案的前瞻性研究[A];第三屆重癥醫(yī)學(xué)大會(huì)論文匯編[C];2009年

5 董寶坤;;多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌感染干預(yù)措施評(píng)價(jià)[A];全國(guó)醫(yī)院感染護(hù)理新進(jìn)展研討會(huì)論文匯編[C];2010年

6 孫立新;劉蘭平;耿蓉娜;溫嬋;;兒童住院患者感染鮑曼不動(dòng)桿菌的監(jiān)測(cè)分析[A];中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)第十八屆全國(guó)醫(yī)院感染管理學(xué)術(shù)年會(huì)論文資料匯編[C];2011年

7 郇京寧;;耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌感染的治療[A];急慢性創(chuàng)面治療新技術(shù)專(zhuān)題系列研討會(huì)之感染創(chuàng)面綜合治療論壇論文匯編[C];2011年

8 董濤;童衛(wèi)杭;李聰然;錢(qián)皎;王睿;;氟喹諾酮類(lèi)和氨基糖苷類(lèi)抗生素對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌體外抗菌活性的研究[A];創(chuàng)新藥物及新品種研究、開(kāi)發(fā)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

9 董濤;童衛(wèi)杭;李聰然;錢(qián)皎;王睿;;氟喹諾酮類(lèi)和氨基糖苷類(lèi)抗生素對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌體外抗菌活性的研究[A];2006第六屆中國(guó)藥學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

10 董濤;王睿;童衛(wèi)杭;柴棟;裴斐;梁蓓蓓;方翼;范燕;李聰然;;鮑曼不動(dòng)桿菌多重耐藥株主動(dòng)外排機(jī)制研究[A];2006第六屆中國(guó)藥學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前5條

1 陶慶春;警惕鮑曼不動(dòng)桿菌[N];健康報(bào);2006年

2 通訊員朱水英 記者李水根;鮑曼不動(dòng)桿菌研究獲多項(xiàng)創(chuàng)新成果[N];健康報(bào);2010年

3 祝建芳邋朱水英 特約記者 俞欣;鮑曼不動(dòng)桿菌存在新耐藥基因[N];健康報(bào);2008年

4 福建省立醫(yī)院呼吸內(nèi)科主治醫(yī)師 王大旋 本報(bào)記者 曾令浩 整理;治療多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌感染,聯(lián)合用藥為王道[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2011年

5 山東省日照市人民醫(yī)院 劉麗娟 北京大學(xué)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 陳宏斌;院內(nèi)細(xì)菌耐藥有分布圖[N];健康報(bào);2014年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李曦;鮑曼不動(dòng)桿菌plsC與abrP介導(dǎo)替加環(huán)素耐藥機(jī)制的研究[D];浙江大學(xué);2016年

2 陳菁;多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的分子流行特征分析及整合子介導(dǎo)的耐藥機(jī)制研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2014年

3 應(yīng)春妹;碳青霉烯類(lèi)耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥機(jī)制研究[D];上海交通大學(xué);2015年

4 李沖;山東省ICU鮑曼不動(dòng)桿菌血流感染的臨床研究[D];山東大學(xué);2016年

5 高建平;呼出氣檢測(cè)在鑒別鮑曼不動(dòng)桿菌呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎與定植中的研究[D];浙江大學(xué);2016年

6 周玉;老年患者鮑曼不動(dòng)桿菌流行特點(diǎn)、耐藥機(jī)制和抗菌藥物篩選研究[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

7 彭敬紅;鮑曼不動(dòng)桿菌醫(yī)院感染及耐藥機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2009年

8 陳威震;多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的分子流行病學(xué)和耐藥相關(guān)機(jī)制的研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2011年

9 許攀峰;多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌基因組與“耐藥島”的比較基因組學(xué)研究[D];浙江大學(xué);2012年

10 符一騏;中國(guó)部分地區(qū)鮑曼不動(dòng)桿菌多位點(diǎn)序列分型及碳青霉烯類(lèi)抗生素耐藥機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王禹;多重耐藥性鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體的篩選及其理化性質(zhì)與生物信息學(xué)分析[D];大連大學(xué);2015年

2 梁立杰;機(jī)械通氣住院患者多重耐藥（MDR）鮑曼不動(dòng)桿菌感染分布特征及耐藥影響因素[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

3 張旭;替加環(huán)素治療泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌所致呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎的臨床療效分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 閆振宇;泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌呼吸機(jī)相關(guān)肺炎巢式病例對(duì)照研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 鄭薇;多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)替加環(huán)素耐藥相關(guān)機(jī)制的研究[D];成都醫(yī)學(xué)院;2015年

6 裴歡歡;2010-2012年某三甲醫(yī)院多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌感染的臨床特征、危險(xiǎn)因素及預(yù)后分析[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

7 楊艷;廈門(mén)地區(qū)泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥機(jī)制的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

8 晏奎;磷霉素對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌生物被膜干預(yù)作用的體外研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2015年

9 魏振波;鮑曼不動(dòng)桿菌外膜蛋白A1S_0115A的克隆、表達(dá)及免疫保護(hù)性研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

10 盧靈鋒;多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥基因及分子流行病學(xué)研究[D];四川醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1414177