本文關(guān)鍵詞：9V型肺炎球菌疫苗中多糖含量微孔板蒽酮-硫酸檢測方法的建立及驗證　出處：《微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展》2016年03期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的建立微孔板蒽酮-硫酸法檢測9V型肺炎球菌疫苗中多糖含量的檢測方法,并對其進(jìn)行驗證和初步應(yīng)用。方法通過對蒽酮-硫酸方法的改進(jìn),建立檢測9V型肺炎球菌疫苗中多糖含量穩(wěn)定可靠的微孔板蒽酮-硫酸法。分別對蒽酮-硫酸法中硫酸溶液濃度、加熱時間進(jìn)行優(yōu)化,并對建立的方法進(jìn)行特異性、線性、精密度及準(zhǔn)確度的驗證。結(jié)果最佳硫酸溶液比例為6∶1(濃硫酸∶水),最佳加熱時間為10 min。在檢測9V型肺炎球菌多糖、多糖衍生物及多糖蛋白結(jié)合物中多糖含量時,此方法特異性強;在20~120μg/m L范圍內(nèi),標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良好(r20.995);實驗內(nèi)及實驗間均具有良好的精密度(CV值分別為2.92%~3.32%和3.10%~4.06%);準(zhǔn)確度試驗中3個質(zhì)量濃度的回收率均在96.17%~106.63%之間。結(jié)論微孔板蒽酮-硫酸法可被用來有效、準(zhǔn)確、穩(wěn)定地檢測9V型肺炎球菌多糖、多糖衍生物及多糖蛋白結(jié)合物中多糖的含量,該方法較傳統(tǒng)蒽酮-硫酸法操作簡便快捷,節(jié)約樣品、試劑等材料,非常適用于相關(guān)的疫苗生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制。
[Abstract]:Objective to establish a method for the determination of polysaccharides in 9V pneumococcal vaccine by microporous anthrone sulfuric acid method, and to verify and apply it. Methods the method of anthrone-sulfuric acid was improved. A stable and reliable micropore plate anthrone sulfuric acid method was established for the detection of polysaccharide in 9V pneumococcal vaccine. The concentration and heating time of sulfuric acid solution in anthrone-sulfuric acid method were optimized. The specificity, linearity, precision and accuracy of the method were verified. Results the optimum ratio of sulfuric acid solution was 6: 1 (concentrated sulfuric acid: water). The optimum heating time was 10 min. The method was specific in detecting the content of polysaccharide in 9V pneumococcal polysaccharide, polysaccharide derivatives and polysaccharide protein conjugate. In the range of 20 渭 g / mL, the standard curve has a good linearity. The CV values were 2.92% and 3.10% and 4.06%, respectively. The recoveries of the three mass concentrations in the accuracy test were 96.17 and 106.63% respectively. Conclusion the microporous plate anthrone sulfuric acid method can be used effectively and accurately. The content of polysaccharide in 9V pneumococcal polysaccharide, polysaccharide derivative and polysaccharide protein conjugate was determined stably. This method is simpler and faster than the traditional anthrone-sulfuric acid method and saves samples and reagents. It is very suitable for quality control in the process of vaccine production.
【作者單位】： 蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司第一研究室甘肅省疫苗工程技術(shù)研究中心;中國生物技術(shù)股份有限公司;
【基金】：“十二五”國家高技術(shù)發(fā)展研究計劃(863計劃)疫苗研發(fā)關(guān)鍵技術(shù)及產(chǎn)品研發(fā)項目(2012AA02A401)
【分類號】：R392-33
【正文快照】： 肺炎球菌多糖含量是肺炎球菌多糖疫苗及結(jié)合疫苗生產(chǎn)過程中重要的質(zhì)量控制指標(biāo)之一。目前檢測肺炎球菌多糖含量的常用方法為蒽酮-硫酸法[1],此方法中,加熱和強酸環(huán)境使得多糖糖苷鍵水解成為單糖,單糖脫水成為糠醛或羥甲基糠醛,再與蒽酮反應(yīng)產(chǎn)生有色物質(zhì),在620 nm處有最大光吸

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1 楊e，

本文編號：1410904