本文關(guān)鍵詞：以小鼠N-乙酰氨基葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶為靶點miRNA的篩選和鑒定　出處：《大連醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：N-乙酰氨基糖基轉(zhuǎn)移酶(GnT)催化GlcNAc的轉(zhuǎn)移,參與天冬酰胺連接型聚糖(N-聚糖)或絲氨酸/蘇氨酸連接型聚糖(O-聚糖)的合成,在生物體內(nèi)發(fā)揮重要功能。GnT至少分為GnTⅠ到GnTⅥ六類,其中GnTⅢ能夠?qū)DP-GlcNAc中的GlcNAc以β1,4連接的方式轉(zhuǎn)移到N-聚糖核心的β甘露糖上,催化生成平分型的GlcNAc,而平分型結(jié)構(gòu)不能成為GnTⅡ、GnTⅣ、GnTⅤ等其它糖基轉(zhuǎn)移酶的底物。GnTⅣ能夠?qū)DP-GlcNAc中的GlcNAc以β1, 4連接的方式催化到N-糖鏈寡糖核結(jié)構(gòu)的GlcNAcβ1, 2-Manα1, 3臂上,從而參與復(fù)雜型糖鏈三天線以及四天線分支的合成。腫瘤的發(fā)生常常伴隨著糖蛋白糖鏈結(jié)構(gòu)的改變,一些糖基轉(zhuǎn)移酶的產(chǎn)物,如GnTⅤ的產(chǎn)物N-糖鏈β1,6分支結(jié)構(gòu)與腫瘤轉(zhuǎn)移潛能密切相關(guān)。 microRNA是一類在轉(zhuǎn)錄后水平起調(diào)控作用的非編碼的小RNA分子,其通過與靶基因mRNA的3'-非翻譯區(qū)結(jié)合,在轉(zhuǎn)錄后水平上對基因的表達進行調(diào)節(jié)。miRNA可以影響mRNA的穩(wěn)定性,也可以對mRNA進行降解。但是,目前有關(guān)以糖基轉(zhuǎn)移酶為靶點miRNA篩選及其功能研究的報道很少。 本研究以篩選N-乙酰氨基葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶GnT為靶點的miRNA為目的,以高通量芯片miRNA表達譜分析和生物信息學(xué)分析結(jié)果為基礎(chǔ),構(gòu)建含有小鼠Mgat3,Mgat4a,Mgat5的3'UTR片段的雙熒光素酶報告基因重組質(zhì)粒GnTⅢ/pGL3、GnTⅣ/pGL3、GnTⅤ/pGL3,將其與侯選miRNA共轉(zhuǎn)染小鼠肝癌Hepa1-6細胞,通過檢測熒光素酶活性的變化,篩選以GnTⅢ、GnTⅣ、GnTⅤ為靶點的miRNA,進一步通過定量PCR、流式細胞術(shù)分析等技術(shù)檢證miRNA對GnT表達、N-聚糖分支結(jié)構(gòu)的合成及細胞生物學(xué)行為的影響。 結(jié)果表明:miR-23與雙熒光素酶報告基因重組質(zhì)粒GnTⅢ/pGL3共轉(zhuǎn)染后,熒光素酶活性下降;miR-23轉(zhuǎn)染使Hepa1-6細胞Mgat3基因表達水平下降,平分型的GlcNAc的表達水平降低。 以上結(jié)果提示:miR-23可能是以N-乙酰氨基糖基轉(zhuǎn)移酶Ⅲ為靶點的miRNA。
[Abstract]:GnT 鈪，

本文編號：1401583