本文關(guān)鍵詞：肉雞源性腸桿菌科細菌中耐藥基因、整合子及ISCR1元件的研究　出處：《山東大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：自1940年青霉素被發(fā)現(xiàn)以來,抗生素得以迅速發(fā)展,多種抗生素已被廣泛應(yīng)用于人類臨床治療以及畜牧、水產(chǎn)等領(lǐng)域,人類已經(jīng)嚴重依賴于抗生素的使用。然而,隨著抗生素的大量使用甚至是濫用,以致抗生素耐藥性日益嚴峻,耐藥基因的水平轉(zhuǎn)移是細菌耐藥性廣泛擴散的主要原因之一。整合子作為細菌內(nèi)常見的重組表達系統(tǒng),在細菌耐藥性傳播中起著重要作用,目前在整合子中發(fā)現(xiàn)的基因盒已超80余種,大部分為耐藥性基因盒,幾乎與所有臨床上常用抗菌藥物的抗性有關(guān)。然而比整合子功能更加強大的ISCR元件在其中的作用也不容忽視,兩者均為耐藥基因的水平轉(zhuǎn)移提供了高效的媒介。喹諾酮類和p-內(nèi)酰胺類抗生素是臨床抗感染治療中最常使用的抗生素,并且腸桿菌科細菌為臨床常見條件致病菌,可引起多種呼吸系統(tǒng)感染或泌尿系統(tǒng)感染,因此具有這兩類抗生素耐藥性的腸桿菌科細菌應(yīng)該引起足夠的重視。本論文研究主要是調(diào)查了463株動物源性耐藥性腸桿菌科細菌(包括373株E. coli菌和90株克雷伯氏菌)中抗生素耐藥性流行性情況、多重耐藥機制和耐藥性擴散機制,對畜牧養(yǎng)殖業(yè)中合理選用抗生素、降低耐藥菌株的發(fā)生率與耐藥水平以及調(diào)整新型抗生素的研發(fā)和生產(chǎn)均有積極的意義。1.耐藥性E. coli菌中生理型和整合子及其基因盒陣列的鑒定在373株耐藥E. coli菌中,95.71%(n=357)被鑒定為多重耐藥菌,根據(jù)E. coli菌生理分型實驗,E. coli菌被分為4種生理型(A、B1、B2和D),其中B1型E. coli菌(33.51%)是待測菌株中最主要的生理型。E. coli菌分別對阿莫西林克拉維酸鉀(AMC,99.20%)、強力霉素(DC,92.23%)、磺胺間甲氧嘧啶(SXT,90.88%)、環(huán)丙沙星(CIP,64.61%)、頭孢哌酮/舒巴坦(SBT/CPZ,51.21%)和阿米卡星(AMK,33.78%)均有較高的耐藥率。此外,在373株E. coli菌中,分別在292(78.28%)和49(13.14%)株菌株中檢測到Ⅰ、Ⅱ型整合子,然而并未檢測到Ⅲ型整合子。在E. coli菌中檢測到11種不同基因盒陣列的Ⅰ型整合子：dfrA17-aadA5、dfrA12-orfF-aadA2、 catB3-arr3、dfrA1-aadA1、aacA4-cmlA1、dfrA16-aadA2、dfrA17、arr3-dfrA27-aadA16, aacA4、aadA2和empty。而僅有一種類型Ⅱ型整合子(dfrAl-sat2-aadAl)被檢測到。Ⅰ型整合子均勻分布于各生理型的E. coli菌中,但B21型E. coli菌中Ⅱ型整合子的存在率明顯高于其他生理型菌株中,并且都與Ⅰ型整合子共存。2.克雷伯氏菌中耐藥基因的鑒定與整合子和ISCR元件的分子特點分析在90株克雷伯氏菌中96.67%(n=87)菌株被鑒定為多重耐藥菌,并且96.67%為產(chǎn)p-內(nèi)酰胺酶菌。此外,89株菌被鑒定為KpI型克雷伯氏菌,這類細菌大多數(shù)會引起克雷伯氏菌感染病,而另外1株菌是較為罕見的變棲克雷伯氏菌。待測克雷伯氏菌分別對頭孢噻肟(100.00%),氨芐青霉素(98.89%),氯霉素(92.22%),卡那霉素(91.10%),頭孢他啶(82.22%),環(huán)丙沙星(80.00%),四環(huán)素(78.89%),頭孢吡肟(73.33%)和頭孢哌酮(48.89%)均有較高的耐藥率。分別在77和5株克雷伯氏菌中分別檢測到了Ⅰ型和Ⅱ型整合子,而并未檢測到Ⅲ型整合子。在77株Ⅰ型整合子陽性菌中,僅有3種不同基因盒陣列的Ⅰ型整合子被檢測到：dfrA12-orfF-aadA2、dfrA17-aadA5和empty;而僅有1種類型Ⅱ型整合子(frAl-sat2-aadA)1被檢測到。此外,在46株復(fù)雜Ⅰ型整合子中發(fā)現(xiàn)了4種不同類型的ISCR1元件介導(dǎo)的下游結(jié)構(gòu),其中存在率最高的下游結(jié)構(gòu)：ISCR1-sapA-like-qnrB2-qacEΔ1。根據(jù)質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮類耐藥(PMQR)基因和超廣譜p-內(nèi)酰胺類耐藥(ESBL)基因的存在率,卡方分析揭示三者之間分別都有極顯著相關(guān)性(p0.01)。此外,接合轉(zhuǎn)移實驗中,較高比例的PMQR基因、Ⅰ型整合子都與ESBL基因共轉(zhuǎn)移,卡方分析揭示了在基因水平轉(zhuǎn)移過程中,PMQR基因與Ⅰ型整合子有極顯著的相關(guān)性(p0.01)。此外,多位點序列分型(MLST)揭示,這些從肉雞分離的細菌廣泛分布于人類,且耐藥基因不僅通過克隆菌株擴散,也通過基因的水平轉(zhuǎn)移。并且抗生素耐藥性不僅僅是通過克隆菌株的擴散,主要是通過基因的水平轉(zhuǎn)移方式進行擴散。這些數(shù)據(jù)說明,耐藥基因伴隨移動性遺傳元件(如整合子)的基因水平轉(zhuǎn)移方式在抗生素耐藥性擴散中起著重要作用。
[Abstract]:Many antibiotics have been widely used in human clinical treatment as well as animal husbandry and aquatic products . Among 373 strains of E . coli , 11 kinds of integrons of different gene cassettes were detected in 292 ( 78.28 % ) and 49 ( 13.14 % ) strains respectively . The results showed that there were only one type 鈪，

本文編號：1391511