本文關(guān)鍵詞：過敏原Fag t 1 低變應(yīng)原分子的構(gòu)建及重組研究　出處：《山西大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 苦蕎過敏原 Fagt1 Cupin超家族 美拉德反應(yīng) 食品加工

【摘要】：苦蕎作為一種藥食同源的作物,具有很好的營養(yǎng)價值和保健作用。但是有報道苦蕎可能引起過敏癥狀,如哮喘、皮炎等,而苦蕎種子中的儲藏蛋白被鑒定為苦蕎主要過敏原。該蛋白屬于Cupin家族的11S球蛋白,在苦蕎種子中含量豐富,穩(wěn)定性好。本文主要從基因工程角度和食品加工角度對苦蕎過敏原進(jìn)行了研究。 本論文首先采用基因重組技術(shù)對苦蕎過敏原Fag t1的核苷酸序列進(jìn)行了重新構(gòu)建,并將重組分子在原核載體中表達(dá)獲得幾種重組蛋白,分別命名為Fag t1-rs1, Fagt1-rs2,和Fagt1-rs3。這些重組蛋白由于失去天然蛋白特殊的結(jié)構(gòu)而喪失了IgE結(jié)合活性,因而免疫活性顯著降低。相比天然Fag t1,重組分子免疫活性降低了約90%,這些低敏分子有希望成為過敏特異性免疫治療的疫苗。同時,解聚狀態(tài)的Fagt1重組分子抗蛋白酶活性也明顯下降。這些結(jié)果說明,11S種子儲藏蛋白的抗酶解穩(wěn)定性和免疫活性都依賴于其空間結(jié)構(gòu)的完整性,設(shè)計實驗改造Cupin食物過敏原的天然構(gòu)象是降低其變應(yīng)原性的有效策略。 其次,本論文還就食品加工過程對苦蕎過敏原免疫活性的影響進(jìn)行了研究。通過提取苦蕎自身的多糖,研究在多糖成分存在下,過敏蛋白發(fā)生的美拉德反應(yīng)。結(jié)果表明,在70℃,3d條件下過敏蛋白與糖自發(fā)美拉德共價連接后,糖化蛋白在許多性質(zhì)諸如,電泳性質(zhì),二級結(jié)構(gòu),溶解度及穩(wěn)定性等都發(fā)生了改變。同時通過ELISA和免疫點雜交,使用患者血清和兔多抗對其免疫活性進(jìn)行分析,結(jié)果顯示糖化蛋白IgE和IgG結(jié)合活性相比天然蛋白明顯降低。我們推測過敏原與糖分子的結(jié)合改變了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),尤其抗原表位發(fā)生了變化,導(dǎo)致過敏原活性明顯降低。本實驗結(jié)果提示,食品加工中的加熱糖化過程可能會影響過敏活性。
[Abstract]:Buckwheat as a medicinal and edible crops, has good nutritional value and health care function. But there are reports of buckwheat may cause allergic symptoms such as asthma, dermatitis, and buckwheat seeds in storage protein was identified as the major allergen in tartary buckwheat. The 11S globulin protein belonging to the Cupin family, rich in content. Tartary buckwheat has good stability. This paper mainly from the perspective of genetic engineering and food processing of buckwheat allergens were studied.
Firstly, using the gene recombination technique of nucleotide sequence of tartary buckwheat allergen Fag T1 was re constructed, and the recombinant expression of several recombinant proteins in prokaryotic vectors, named Fag t1-rs1, Fagt1-rs2 Fagt1-rs3., and the recombinant protein to natural protein structure due to special and lost IgE binding activity. Thus the immune activity decreased significantly. Compared with natural Fag T1, the immune activity of recombinant molecules is reduced by about 90%, these molecules have low sensitivity to become allergy specific immunotherapy vaccine. At the same time, the recombinant Fagt1 molecular depolymerization state of anti protease activity also decreased significantly. These results suggest that the integrity of the anti enzyme stability and immune activity depending on the spatial structure of the seed storage protein 11S, Cupin transformation design experiment of food allergens is to reduce the natural conformation of effective strategies of its allergenicity.
Secondly, this paper also studies the effect of food processing on buckwheat allergen activity. By extracting polysaccharide from Tartary Buckwheat's research in the presence of polysaccharides, Maillard reaction allergic protein occurred. The results showed that at 70 degrees C, allergic protein and sugar under the condition of 3D spontaneous Maillard covalently linked. Electrophoretic properties of glycated protein in many properties, such as, two level structure, solubility and stability are changed. At the same time by ELISA and immuno dot blot, using serum and rabbit polyclonal antibodies were analyzed on the immune activity, the results showed IgE glycosylated protein and IgG binding activity than natural protein decreased significantly. We speculate that the combination of allergy the original and the sugar molecule changes the structure of the protein, especially epitope changes, resulting in allergen activity decreased significantly. The results suggest that the heat in the saccharification of food processing The process may affect the anaphylaxis.

【學(xué)位授予單位】：山西大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R392

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本文編號：1386263