本文關(guān)鍵詞：小腸上皮內(nèi)淋巴細胞在抵抗鼠傷寒沙門氏菌感染中的作用及機制探討　出處：《山東大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 上皮內(nèi)淋巴細胞 傷寒 NKG2D Qa-1b

【摘要】：目的 腸道免疫系統(tǒng)對于維持腸道粘膜的穩(wěn)態(tài)發(fā)揮著重要作用,它既要保護機體免受病原菌的入侵,又要對腸道中的共生菌保持耐受,其區(qū)分共生菌群和致病微生物的機制至今仍未得到闡明。腸道上皮內(nèi)淋巴細胞(iIELs)鑲嵌在腸道上皮細胞間,對粘膜免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)起著重要作用。iIELs被認為是一群高度活化的大顆粒淋巴細胞,可以迅速地對早期感染產(chǎn)生免疫應(yīng)答。 本研究選用一種腸道致病菌鼠傷寒沙門氏菌,觀察小鼠經(jīng)口感染后其iIELs不同亞群的表型變化,并以腸道共生菌之一大腸桿菌為對照,探究在致病菌感染過程中發(fā)揮主要抵抗作用的iIELs亞群,并探討其抗感染的機制,以便于進一步研究在腸道感染過程中免疫應(yīng)答及免疫病理的發(fā)生機制,進而為腸道感染及腫瘤等疾病的治療提供新的策略和思路。 方法 1.小鼠灌胃感染鼠傷寒沙門氏菌,建立腸道感染模型,HE染色檢測傷寒感染后小腸粘膜形態(tài)變化。 2.MTT法檢測傷寒感染后iIELs對鼠T淋巴瘤細胞系YAC-1、鼠結(jié)直腸癌細胞系MCA-38及鼠小腸上皮細胞(IECs)殺傷能力的變化。 3. RT-PCR檢測傷寒感染后iIELs殺傷相關(guān)分子基因水平的表達變化；Real-TimePCR檢測傷寒感染后小腸上皮細胞Qa-1及NKG2D相關(guān)配體基因水平表達的變化。 4.小鼠體內(nèi)阻斷NKG2D后檢測小腸組織中傷寒菌的負載量。 5.流式細胞術(shù)檢測傷寒感染后iIELs各亞群及IECs的表型變化。 6.免疫磁珠法分選CD8+TCRγδ+iIELs亞群,檢測傷寒感染后該亞群的表型和殺傷功能的變化。 7.小鼠體內(nèi)清除γδT細胞后檢測肝、脾、小腸及派氏結(jié)中傷寒菌的負載量。 結(jié)果 1.鼠傷寒沙門氏菌經(jīng)口感染可引起小鼠腸炎； 2.鼠傷寒沙門氏菌感染時CD8+TCRγδ+ilELs亞群的比例增加,iIELs對腫瘤細胞及感染的腸上皮細胞殺傷活性增強； 3.鼠傷寒沙門氏菌感染可致CD8+TCRγδ+iIELs亞群表面NKG2D的表達增強； 4.鼠傷寒沙門氏菌感染可致IECs表面MULT1表達增強； 5.體內(nèi)阻斷NKG2D增加了傷寒菌在小腸中的負載量； 6.體內(nèi)清除γδT細胞加劇了傷寒菌對機體的侵襲； 7.鼠傷寒沙門氏菌感染降低了IECs表面Qa-1b的表達水平； 8.小鼠iIELs對共生菌經(jīng)口感染保持耐受狀態(tài)； 9.Nodl可能參與IECs對傷寒菌的識別。 結(jié)論 1. iIELs,尤其是CD8+TCRγδ+iIELs亞群,在小腸抵抗鼠傷寒沙門氏菌感染中發(fā)揮重要作用； 2.傷寒感染時CD8+TCRγδ+iIELs亞群表面NKG2D表達增強,腸上皮細胞NKG2D配體MULT-1表達增強,而抑制性配體Qa-1b表達下降,導(dǎo)致活化性信號和抑制性信號平衡的失調(diào)； 3.NKG2D及其配體的相互識別參與了CD8+TCRy8+iIELs亞群對傷寒感染的腸上皮細胞的清除； 4.腸上皮細胞Qa-1 b高表達可能是其免受iIELs攻擊,保持對腸道共生菌耐受的機制之一。
[Abstract]:Purpose The intestinal immune system plays an important role in maintaining the homeostasis of intestinal mucosa. It not only protects the body from the invasion of pathogens, but also maintains tolerance to symbiotic bacteria in the intestinal tract. The mechanism of differentiation between symbiotic flora and pathogenic microorganism has not been elucidated. Intestinal intraepithelial lymphocytes (iIELs) are embedded in intestinal epithelial cells. The regulation of mucosal immune response plays an important role. IIELs are considered to be a group of highly activated large granular lymphocytes which can react quickly to early infection. In this study, the phenotypic changes of different subgroups of iIELs in mice after oral infection were observed, and Escherichia coli, one of the enteric symbiotic bacteria, was used as control. To explore the iIELs subgroup which plays a major role in the process of pathogenic bacteria infection and to explore its anti-infection mechanism in order to further study the immune response and the pathogenesis of immunopathology in the process of intestinal infection. It provides new strategies and ideas for the treatment of intestinal infection and tumor. Method 1. Mice were infected with Salmonella typhimurium. The intestinal infection model was established to detect the changes of intestinal mucosal morphology after typhoid infection by HE staining. 2. MTT assay was used to detect the effect of iIELs on T lymphoma cell line YAC-1 after typhoid infection. Changes of cytotoxicity of murine colorectal cancer cell line MCA-38 and intestinal epithelial cells (IECs). 3. RT-PCR was used to detect the expression of iIELs killer related gene after typhoid infection. Real-TimePCR was used to detect the expression of Qa-1 and NKG2D related ligand genes in intestinal epithelial cells after typhoid infection. 4. After blocking NKG2D in mice, the loading amount of typhoid bacteria in small intestine was detected. 5. The phenotypic changes of iIELs subsets and IECs after typhoid infection were detected by flow cytometry. 6. The CD8 TCR 緯 未 iIELs subsets were separated by immunomagnetic beads, and the phenotype and killing function of the subgroups were detected after typhoid infection. 7. After removing 緯 未 T cells in mice, the loading amount of typhoid bacteria in liver, spleen, small intestine and Pak's knot was detected. Results 1. The oral infection of Salmonella typhimurium could cause enteritis in mice. 2. The proportion of CD8 TCR 緯 未 ilELs subsets increased with the infection of Salmonella typhimurium. 3.The expression of NKG2D on the surface of CD8 TCR 緯 未 iIELs subgroup was enhanced by Salmonella typhimurium infection. 4. Salmonella typhimurium infection increased the expression of MULT1 on the surface of IECs. 5. Blocking NKG2D in vivo increased the amount of typhoid bacteria loading in the small intestine. 6. Removal of 緯 未 T cells in vivo aggravated the invasion of typhoid. 7. Salmonella typhimurium infection decreased the expression of Qa-1b on the surface of IECs. 8. Mouse iIELs maintained tolerance to symbiotic bacteria by oral infection. 9. Nodl may be involved in the identification of typhoid by IECs. Conclusion 1. IIELs, especially CD8 TCR 緯 未 iIELs subsets, play an important role in intestinal resistance to Salmonella typhimurium infection. 2. The expression of NKG2D on the surface of CD8 TCR 緯 未 iIELs subgroup and MULT-1 expression of NKG2D ligand in intestinal epithelial cells were increased during typhoid infection. However, the decrease of Qa-1b expression of inhibitory ligand resulted in the imbalance of activation signal and inhibitory signal balance. 3. The recognition of NKG2D and its ligand involved in the clearance of typhoid infected intestinal epithelial cells by CD8 TCRy8 iIELs subsets. 4. The high expression of Qa-1 b in intestinal epithelial cells may be one of the mechanisms of its tolerance to intestinal symbiotic bacteria from iIELs attack.
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R392

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本文編號：1377975