本文關(guān)鍵詞：小鼠GSTK1基因啟動(dòng)子調(diào)控機(jī)制的初步研究　出處：《蘇州大學(xué)》2012年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： mGSTK1基因 熒光素酶 羅格列酮 3T3-L1脂肪細(xì)胞

【摘要】：第一部分小鼠GSTK1基因啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒的構(gòu)建及功能鑒定 目的： 構(gòu)建小鼠谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶K1(mouse Glutathione S-transferase kappa, mGSTK1)啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒，并分析其活性。 方法： 根據(jù)GeneBank中mGSTK1基因序列設(shè)計(jì)引物，應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增mGSTK1基因啟動(dòng)子片段（翻譯起始點(diǎn)ATG上游-2081～-35區(qū)域），插入pGL3-Basic載體，獲得mGSTK1啟動(dòng)子報(bào)告基因質(zhì)粒pGL3-mGSTK1-promoter-2046。再以pGL3-mGSTK1-promoter-2046為模板，進(jìn)一步獲得了3個(gè)5’端部分缺失的報(bào)告基因質(zhì)粒：pGL3-mGSTK1-promoter-936、pGL3-mGSTK1-promoter-228和pGL3-mGSTK1-promoter-76。利用脂質(zhì)體將不同長(zhǎng)度的mGSTK1啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染3T3-L1和HEK293細(xì)胞，48小時(shí)后檢測(cè)熒光素酶的活性。 結(jié)果： 所構(gòu)建的質(zhì)粒經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定正確。pGL3-mGSTK1-promoter-2046、 pGL3-mGSTK1-promoter-936和pGL3-mGSTK1-promoter-228在二種細(xì)胞株均顯示出較強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄活性，而pGL3-mGSTK1-promoter-76轉(zhuǎn)錄活性顯著降低。 結(jié)論： 成功構(gòu)建mGSTK1基因啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒；翻譯起始點(diǎn)上游的-263～-111區(qū)域是mGSTK1基因啟動(dòng)子的重要區(qū)域。 第二部分羅格列酮對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞和小鼠脂肪組織GSTK1轉(zhuǎn)錄水平的影響 目的： 觀察羅格列酮對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞以及小鼠脂肪組織中GSTK1轉(zhuǎn)錄水平的影響，并分析過(guò)氧化物酶增殖體激活受體γ （PPARγ）對(duì)報(bào)告基因質(zhì)粒pGL3-mGSTK1-promoter-2046熒光素酶活性的影響。 方法： 1.3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)分化成熟后，，10μM羅格列酮作用24小時(shí)后收集細(xì)胞，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)GSTK1和C/EBPα基因mRNA水平的變化。以DMSO處理24小時(shí)為對(duì)照組。 2.取正常小鼠脂肪組織，10μM羅格列酮作用24小時(shí)后收集組織，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)GSTK1和C/EBPα基因mRNA水平的變化。以DMSO處理24小時(shí)為對(duì)照組。 3.將pGL3-mGSTK1-promoter-2046與含PPARγ及其配體RXR表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，48小時(shí)后檢測(cè)報(bào)告基因質(zhì)粒熒光素酶的活性變化。 結(jié)果： 1.在誘導(dǎo)分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞中，與對(duì)照組相比，羅格列酮組GSTK1mRNA表達(dá)水平有上升的趨勢(shì)（p＞0.05），C/EBPαmRNA表達(dá)水平明顯增高（p㩳0.05）。 2.在小鼠脂肪組織中，與對(duì)照組相比，羅格列酮組GSTK1和C/EBPαmRNA水平均明顯上調(diào)（p㩳0.05）。 3. PPARγ對(duì)pGL3-mGSTK1-promoter-2046的熒光素酶活性沒(méi)有顯著影響。 結(jié)論： 1.羅格列酮上調(diào)誘導(dǎo)分化成熟后的3T3-L1脂肪細(xì)胞以及小鼠脂肪組織中的GSTK1和C/EBPα基因的mRNA水平。 2. GSTK1基因翻譯起始位點(diǎn)上游-2081到-35區(qū)域可能不存在PPARγ的結(jié)合位點(diǎn)；GSTK1mRNA水平的升高可能與C/EBPα增加有關(guān)。
[Abstract]:Construction and functional Identification of luciferase reporter Gene plasmid of Mouse GSTK1 Gene Promoter Objective: Mouse Glutathione S-transferase kappa of mouse glutathione S-transferase K1 was constructed. MGSTK1) luciferase reporter gene plasmid and its activity were analyzed. Methods: Primers were designed according to the sequence of mGSTK1 gene in GeneBank. PCR technique was used to amplify the promoter fragment of mGSTK1 gene (ATG upstream of ATG) and inserted into pGL3-Basic vector. The reporter gene plasmid pGL3-mGSTK1-promoter-2046of mGSTK1 promoter was obtained. Then pGL3-mGSTK1-promoter-2046 was used. For the template. Three reporter gene plasmids: pGL3-mGSTK1-promoter-936 were further obtained. PGL3-mGSTK1-promoter-228 and pGL3-mGSTK1-promoter-76. using liposomes to drive mGSTK1 promoters of different lengths. The plasmids of luciferase reporter gene were transiently transfected into 3T3-L1 and HEK293 cells. Luciferase activity was detected 48 hours later. Results: The constructed plasmid was identified by restriction endonuclease digestion and sequencing. PGL3-mGSTK1-promoter-2046 was identified correctly. PGL3-mGSTK1-promoter-936 and pGL3-mGSTK1-promoter-228 showed strong transcriptional activity in both cell lines. However, the transcriptional activity of pGL3-mGSTK1-promoter-76 decreased significantly. Conclusion: The plasmids of luciferase reporter gene of mGSTK1 gene promoter were successfully constructed and the region of -263 ~ (-111) was an important region in the promoter of mGSTK1 gene. Effect of rosiglitazone on GSTK1 transcription in 3T3-L1 adipocytes and adipose tissues of mice Objective: To observe the effect of rosiglitazone on GSTK1 transcription in 3T3-L1 adipocytes and adipose tissues of mice. The effect of peroxidase proliferator activated receptor (緯 -PPAR- 緯) on the luciferase activity of reporter gene plasmid pGL3-mGSTK1-promoter-2046 was analyzed. Methods: After 1. 3T3-L1 cells were differentiated and matured, 10 渭 M rosiglitazone was used for 24 hours to collect the cells. The changes of mRNA levels of GSTK1 and C / EBP 偽 gene were detected by real-time fluorescence quantitative PCR, and the control group was treated with DMSO for 24 hours. 2. 10 渭 M rosiglitazone was taken from the adipose tissue of normal mice for 24 hours, and the tissue was collected after exposure to rosiglitazone for 24 hours. The changes of mRNA levels of GSTK1 and C / EBP 偽 gene were detected by real-time fluorescence quantitative PCR, and the control group was treated with DMSO for 24 hours. 3. PGL3-mGSTK1-promoter-2046 was co-transfected into HEK293 cells with PPAR 緯 and its ligand RXR expression plasmid. The luciferase activity of the reporter plasmid was detected 48 hours later. Results: 1. In 3T3-L1 adipocytes, the expression of GSTK1mRNA in rosiglitazone group was higher than that in control group (p > 0.05). The expression of C / EBP 偽 mRNA was significantly increased. 0.05. 2. In adipose tissue of mice, the levels of GSTK1 and C / EBP 偽 mRNA in rosiglitazone group were significantly up-regulated compared with control group. 0.05. 3. PPAR 緯 had no significant effect on luciferase activity of pGL3-mGSTK1-promoter-2046. Conclusion: 1. Rosiglitazone upregulated the mRNA levels of 3T3-L1 adipocytes and GSTK1 and C / EBP 偽 genes in mouse adipose tissue. 2. There may be no binding sites of PPAR 緯 in the upstream of the translation initiation site of GSTK1 gene from -2081 to -35; The increase of GSTK1mRNA level may be related to the increase of C / EBP 偽.
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R363

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 郝巧玲,呂斌,周宜開(kāi),程光明;生物發(fā)光法快速檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)三磷酸腺苷[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年01期

2 尉繼征;熊偉;祝慶余;;生物發(fā)光技術(shù)在活體成像檢測(cè)中的應(yīng)用[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;2006年03期

3 樊粉霞;衛(wèi)瑋;柳惠圖;張偉;;紫龍金對(duì)BGC-823細(xì)胞增殖的抑制作用及對(duì)p16~(INK4a)啟動(dòng)子活性的影響[J];北京師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2010年01期

4 張華,供田洋,大村智;真菌KS-1995產(chǎn)生的增加LDLR基因表達(dá)的活性物質(zhì)的研究[J];中國(guó)抗生素雜志;1998年04期

5 李淑德,許國(guó)銘,李兆申;雞螺桿菌誘導(dǎo)胃上皮細(xì)胞白細(xì)胞介素8轉(zhuǎn)錄及病理意義[J];胃腸病學(xué);2002年02期

6 黃瑞燕,許麗艷,許曉玲,方栩佳,陳波,牛永東,李恩民;NGAL基因5’側(cè)翼區(qū)啟動(dòng)子區(qū)的克隆與鑒定[J];腫瘤防治研究;2005年06期

7 陳濤;Bhatta SK;劉建平;林浩銘;萬(wàn)云樂(lè);陳翔;羅興喜;區(qū)慶嘉;;應(yīng)用生物熒光法檢測(cè)三磷酸腺苷評(píng)估肝細(xì)胞功能儲(chǔ)備(英文)[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2008年42期

8 孟希亭;林晨;梅佳;王海娟;馬飛;張金龍;張穎;錢(qián)海利;;活體成像系統(tǒng)檢測(cè)攜熒光素酶增殖缺陷型腺病毒在小鼠體內(nèi)的表達(dá)和分布[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;2011年04期

9 王小紅,王升啟,李夢(mèng)東,朱寶珍;HCV 5'NCR片段調(diào)控?zé)晒馑孛副磉_(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其在HepG2細(xì)胞中的表達(dá)[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;1999年01期

10 賈戰(zhàn)生,周永興,焦成松;丙型肝炎病毒與熒光素酶融合基因細(xì)胞模型的初步建立[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2000年07期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 許豐雯;徐丹;王明曉;陳啟民;耿運(yùn)琪;喬文濤;;以熒光素酶為報(bào)告基因定量檢測(cè)原型泡沫病毒的指示細(xì)胞系的建立[A];2010年第四屆全國(guó)微生物遺傳學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2010年

2 李風(fēng)云;余軍平;張治平;崔宗強(qiáng);王殿冰;危宏平;張先恩;;溶液增強(qiáng)Gaussia熒光素酶的BRET傳感器檢測(cè)蛋白酶[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第28屆學(xué)術(shù)年會(huì)第4分會(huì)場(chǎng)摘要集[C];2012年

3 徐明旭;賴(lài)茂毅;程寧;丁培國(guó);夏東嵐;芮珉;王鶯;張穎妹;王露;韓文玲;馬大龍;;CKLF基因與CKLFSF1基因間的順式調(diào)控元件[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

4 劉亞寧;劉成剛;趙新華;朱美財(cái);陳濤;;利用生物發(fā)光測(cè)定PBP對(duì)熒光素酶復(fù)性的促進(jìn)作用[A];第九次全國(guó)生物物理大會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2002年

5 杜郁;楊媛;司書(shū)毅;洪斌;;人ApoA-I基因表達(dá)上調(diào)劑篩選模型的建立[A];2010年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十屆中國(guó)藥師周論文集[C];2010年

6 陳倩;周福祥;於海軍;謝叢華;周云峰;;腫瘤特異性生物發(fā)光真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其初步特點(diǎn)的研究[A];湖北省抗癌協(xié)會(huì)青年委員會(huì)成立大會(huì)暨第一屆青年學(xué)術(shù)論壇資料匯編[C];2009年

7 岳偉偉;周愛(ài)玉;何保山;羅金平;蔡新霞;;基于生物發(fā)光技術(shù)的細(xì)菌總數(shù)快速檢測(cè)儀[A];第十屆全國(guó)敏感元件與傳感器學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

8 郝永新;李雪蓮;陳丹;劉群;;弓形蟲(chóng)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染中不同啟動(dòng)子介導(dǎo)的雙報(bào)告基因優(yōu)化[A];第二屆全國(guó)人畜共患病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

9 楊國(guó)斌;袁國(guó)華;陳碩;;BMP2調(diào)控DSPP基因轉(zhuǎn)錄由DLX3/OSX信號(hào)通路介導(dǎo)[A];全國(guó)第八次牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

10 郝永新;李雪蓮;劉群;陳丹;丁雋;張維;;荷斯坦奶牛IFN-γ基因轉(zhuǎn)染弓形蟲(chóng)的初步研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲(chóng)學(xué)分會(huì)第六次代表大會(huì)暨第十次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前6條

1 記者 陳勇 曉安;“改裝”艾滋病毒成克癌“導(dǎo)彈”[N];新華每日電訊;2005年

2 記者 李紅;讓科學(xué)和藝術(shù)相結(jié)合[N];科技日?qǐng)?bào);2000年

3 本報(bào)記者 李嬋;克隆豬身上發(fā)熒光[N];北京科技報(bào);2004年

4 本報(bào)記者 馮衛(wèi)東;邁向人造生命的重要一步[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

5 特約通訊員韓國(guó)宏 孫先榮 蘇輝;沈陽(yáng)市職工自主創(chuàng)新成果顯著[N];中國(guó)職工科技報(bào);2009年

6 記者 常麗君;果蠅蛋白與功能蛋白編織成天然纖維[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 涂靜;滲透壓對(duì)人氣道上皮細(xì)胞黏蛋白5AC分泌的調(diào)控研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

2 李維娜;乙型肝炎病毒編碼蛋白對(duì)宿主炎性基因的調(diào)控作用及其機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2011年

3 高博;熒光素酶標(biāo)記的HCV細(xì)胞模型的建立及其在藥物評(píng)價(jià)等方面的應(yīng)用[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

4 姜軼群;利用海腎熒光素酶雙分子互補(bǔ)技術(shù)研究Hsp90/Cdc37相互作用[D];吉林大學(xué);2010年

5 張靜;神經(jīng)元限制性沉默因子對(duì)CART基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控作用及其機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

6 徐霞;鳥(niǎo)氨酸脫羧酶（ODC）及轉(zhuǎn)錄因子RUNX3在胃癌中表達(dá)失調(diào)的分子機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2012年

7 王蕩;口蹄疫病毒L~（pro）和3C~（pro）調(diào)控宿主抗病毒天然免疫反應(yīng)的分子機(jī)制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

8 田妍妍;MicroRNA-10b通過(guò)下調(diào)靶基因KLF4的表達(dá)促進(jìn)人食管癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

9 金平;多聚乙烯基亞胺介導(dǎo)的自殺基因系統(tǒng)對(duì)卵巢癌靶向殺傷效應(yīng)的研究[D];山東大學(xué);2005年

10 朱蘭蘭;海洋細(xì)菌P.leiognathi的發(fā)光性能研究及其在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用探索[D];中國(guó)海洋大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 胡文秀;小鼠GSTK1基因啟動(dòng)子調(diào)控機(jī)制的初步研究[D];蘇州大學(xué);2012年

2 吳順泉;多個(gè)microRNAs通過(guò)直接作用于p21的3'UTR調(diào)控p21基因的表達(dá)[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

3 王禮翠;HCV絲氨酸蛋白酶活性監(jiān)測(cè)體系的建立[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2010年

4 翟春媛;豬TLR4基因的突變與功能分析[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

5 劉成柏;用生物發(fā)光免疫技術(shù)檢測(cè)肝腫瘤標(biāo)志物AFP在肝癌早期診斷中的研究[D];吉林大學(xué);2005年

6 薛麗英;SV40增強(qiáng)子修飾的hTERT核心啟動(dòng)子靶向轉(zhuǎn)錄熒光素酶載體的構(gòu)建和鑒定[D];天津醫(yī)科大學(xué);2005年

7 黃麗玲;水稻抗病相關(guān)基因OsDR2的分離克隆和功能鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

8 唐建華;降脂藥物篩選模型的建立及其在決明子降脂作用機(jī)理研究中的應(yīng)用[D];四川大學(xué);2005年

9 劉鳳鳴;人PDCD4啟動(dòng)子的確定及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控的初步研究[D];山東大學(xué);2010年

10 劉艷杰;重組螢火蟲(chóng)熒光素酶及其穩(wěn)定性研究[D];天津大學(xué);2010年

本文編號(hào)：1377176