本文關鍵詞：A類清道夫受體介導的腦缺血損傷研究　出處：《南京醫(yī)科大學》2012年博士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：缺血性腦損傷是一復雜的病理生理學過程，有多個機制參與調(diào)節(jié)，包括固有免疫系統(tǒng)的激活。固有免疫系統(tǒng)通過模式識別受體家族介導炎癥反應，從而加重缺血性腦損傷。A類清道夫受體（SR-A）是一種主要表達于小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞上的模式識別受體，在固有免疫和炎癥反應中發(fā)揮關鍵的作用。SR-A功能直接影響小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞的活性，與多種重要疾病的發(fā)生發(fā)展關系密切。最近的研究結(jié)果表明，SR-A通過激活細胞NF-B促進缺血性腦損傷。由于不同亞型的小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞在炎癥反應中的作用截然不同，SR-A在這些細胞的極性分化中究竟發(fā)揮什么樣的作用尚不清楚。本課題圍繞SR-A對于缺血引起的小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞激活分型的作用開展了系列研究，同時對缺血性腦損傷的發(fā)病機制進行了深入探討。 在大多數(shù)的缺血性腦卒中發(fā)病過程中，缺血組織在初始階段的24小時內(nèi)得不到再灌注。基于這一事實，我們選用永久性大腦中動脈閉塞（MCAO）模型來研究SR-A對缺血性腦損傷的影響。我們分別用栓線對野生型（WT）和SR-A-/-小鼠施行永久性的大腦中動脈閉塞，構(gòu)建MCAO模型。用Western blot和免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)，MCAO后導致小鼠腦組織中SR-A上調(diào)；但是流式細胞術檢測的結(jié)果卻表明，SR-A在經(jīng)典激活型（M1型）和選擇激活型（M2型）小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞中的表達并沒有明顯差異。MCAO后24小時，發(fā)現(xiàn)SR-A-/-小鼠腦組織梗死面積顯著減少，神經(jīng)學功能獲得改善，同時梗死邊緣區(qū)的凋亡細胞明顯減少，提示SR-A基因敲除緩解了MCAO引起的缺血性腦損傷。 接著，我們采用免疫組化和流式細胞術方法，檢測缺血后腦組織小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞激活浸潤及其極性分化的情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與WT小鼠相比，SR-A-/-小鼠腦組織中激活的小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞總量明顯減少，M1型細胞的總量和比例降低，M2型細胞的比例增大。與此相一致，用實時定量PCR檢測缺血腦組織中的各型小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞的產(chǎn)物和標志物，結(jié)果顯示，SR-A-/-小鼠M1型標志物如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-1β（IL-1β）、誘導型一氧化氮合酶（iNOS）和單核細胞趨化蛋白1（MCP-1）比WT組明顯減少，而M2型標志物得到了部分的保留。進一步分析MCAO后小鼠腦組織中的信號通路活性，發(fā)現(xiàn)促炎性NF-κB活性明顯升高，但SR-A-/-小鼠的升高程度顯著低于WT小鼠。應用NF-κB抑制劑并不能減少SR-A-/-小鼠腦組織梗死面積。上述結(jié)果表明，小鼠缺失SR-A后，MCAO引起小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞激活減少，同時細胞向M2型轉(zhuǎn)變，導致促炎性細胞因子分泌減少，NF-κB信號通路活性減弱，從而使缺血性腦損傷得到減緩。 總之，本研究結(jié)果證明，SR-A具有促進小鼠MCAO急性期腦損傷的作用。這一作用的可能機制為：SR-A能夠促進腦缺血后引起的小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞的激活，同時促使細胞向M1型轉(zhuǎn)化，使M1/M2比值上升，導致細胞分泌大量的TNF-α、IL-1β和MCP-1等促炎癥因子，進而作用于腦組織，激活NF-κB信號通路，，促進神經(jīng)元凋亡，使梗死面積增大，神經(jīng)功能損傷。因此，抑制SR-A活性，有望成為干預急性缺血性腦損傷的新選擇。
[Abstract]:SR - A is a kind of pattern recognition receptor which is mainly expressed on microglial cells / macrophages and plays a key role in innate immunity and inflammatory response . In most ischemic stroke , ischemia - reperfusion was not performed within 24 hours of the initial phase . Based on this fact , we studied the effect of SR - A on ischemic brain injury by using the model of middle cerebral artery occlusion . The results of flow cytometry showed that SR - A - / - mouse brain tissue infarction area was significantly reduced and neurological function was improved . At the same time , the apoptosis in the infarct - edge region was significantly reduced , suggesting that SR - A gene knockout alleviated the ischemic brain injury caused by the middle cerebral artery occlusion . The results showed that the total amount and proportion of microglia / macrophages activated in the brain tissue of SR - A - / - mice were significantly decreased compared with WT mice . In conclusion , the results show that SR - A has the effect of promoting the brain injury in the acute stage of middle cerebral ischemia . The possible mechanism of this function is that SR - A can promote the activation of microglial cells / macrophages after cerebral ischemia , and increase the ratio of M1 / M2 to increase the ratio of M1 / M2 to the brain tissue , activate NF - 魏B signaling pathway , promote neuronal apoptosis , increase infarct size and nerve function . Therefore , the inhibition of SR - A activity is expected to be a new choice for the intervention of acute ischemic brain injury .

【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R392

【共引文獻】

相關期刊論文 前10條

1 嚴潔;劉偉;潘慶敏;;急性腦缺血小鼠血漿β-AP含量動態(tài)變化[J];中國臨床神經(jīng)科學;2006年02期

2 劉U

本文編號：1373533