發(fā)布時間：2018-01-01 22:04

  本文關(guān)鍵詞：FGF21對肝細(xì)胞脂代謝的調(diào)控研究　出處：《華中農(nóng)業(yè)大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：肝臟脂肪過度積累會導(dǎo)致肝臟脂肪變性,脂肪肝,肝癌等一系列肝臟疾病。FGF21是近幾年發(fā)現(xiàn)的對脂代謝疾病有重要作用的細(xì)胞因子,其在肝臟中表達(dá)豐度很高,本文利用HepG2細(xì)胞系作為肝細(xì)胞模型,通過油紅O染色確定了FGF21超表達(dá)對肝細(xì)胞甘油三酯積累的影響,分析了其超表達(dá)對肝細(xì)胞中糖脂代謝相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平的調(diào)控,并通過Western Blot和Real-time PCR方法進(jìn)一步分析了過量表達(dá)的FGF21對調(diào)節(jié)脂肪酸合成的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子SREBP1c的表達(dá)、加工的影響；最后借助雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)分析了SREBP-1c對FGF21啟動子轉(zhuǎn)錄活性的影響。研究結(jié)果證明FGF21通過抑制SREBP1c的表達(dá)和加工成熟過程,從而減少SREBP1c靶基因即脂肪酸合成相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄,最后達(dá)到減少肝細(xì)胞甘油三酯積累的目的。另外本文還克隆豬FGF21基因,并對其進(jìn)行組織表達(dá)分析；原核表達(dá)并初步純化該基因的蛋白質(zhì),以豬為模型,為研究該基因的功能提供基礎(chǔ)平臺。以下為本文的具體研究結(jié)果： 1.FGF21抑制肝細(xì)胞的脂肪酸合成過程,但不影響脂肪酸的吸收和VLDL的組裝,進(jìn)而使肝細(xì)胞內(nèi)的甘油三酯積累減少；FGF21也能夠挽救由高濃度脂肪酸引起的SREBP-1c和FAS表達(dá)量的增加；FGF21抑制SREBP-1c基因的轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)的加工及入核；SREBP-1c能夠抑制FGF21的啟動子活性,形成一個反饋抑制的調(diào)節(jié)環(huán)路；最后FGF21抑制肝細(xì)胞的脂肪酸氧化及線粒體的生物合成。另外葡萄糖和ChREBP能夠上調(diào)FGF21 mRNA的表達(dá)水平,而游離脂肪酸和S(?)REBP-1c則抑制FGF21的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。 2.FGF21在糖代謝中幾乎不發(fā)揮作用。只是在基礎(chǔ)條件下抑制糖異生的關(guān)鍵酶PEPCK基因的轉(zhuǎn)錄。 3.獲得豬FGF21全編碼區(qū)627 bp,共編碼208個氨基酸；該基因包含3個外顯子和2個內(nèi)含子,其基因組結(jié)構(gòu)及各個外顯子長度與人和小鼠FGF21的基因組結(jié)構(gòu)相似；FGF21在豬各組織中廣泛表達(dá),其中在肝臟,各脂肪組織(包括腸系膜脂肪組織,附睪脂肪組織和皮下脂肪組織)及腎臟等代謝器官中表達(dá)量較高。
[Abstract]:Liver fat excessive accumulation can lead to hepatic steatosis, fatty liver, liver cancer and liver disease is a series of.FGF21 cytokines found in recent years and plays an important role in lipid metabolism in the liver disease, the expression level is very high, this paper use HepG2 cells as liver cell model was determined by oil red O staining effects of FGF21 overexpression on the accumulation of hepatic triglycerides, analyzed its over expression of transcription on glucose and lipid metabolism related genes in liver cells can regulate the expression of Blot and Real-time, and the Western PCR method for further analysis of the excessive expression of FGF21 expression on the regulation of fatty acid synthesis of the key transcription factor SREBP1c, the influence of processing; finally using the dual luciferase reporter assay system to analysis the influence of SREBP-1c on the transcription activity of FGF21 promoter. The results show that FGF21 inhibit the expression of SREBP1c and Mature industry process, thereby reducing the SREBP1c target gene transcription of genes related to fatty acid synthesis, finally to reduce the accumulation of liver triglyceride. We also cloned the porcine FGF21 gene and its tissue expression analysis; prokaryotic expression of the gene and protein purification in a porcine model, provide a basic platform for study on the function of the gene. The following is the specific research results in this paper:
Fatty acid synthesis process of 1.FGF21 inhibition of liver cells, but does not affect the assembly and absorption of VLDL fatty acids, and the liver cells reduce the accumulation of triglycerides; FGF21 can also save caused by high concentration of fatty acids of SREBP-1c and the increase of FAS expression; FGF21 inhibits transcription and processing of protein and nuclear SREBP-1c gene; SREBP-1c can inhibit FGF21 promoter activity, the formation of a feedback inhibition regulation loop; finally FGF21 inhibit hepatocyte fatty acid oxidation and mitochondrial biogenesis. In addition of glucose and ChREBP can up regulate the expression of FGF21 and mRNA, free fatty acids and S (?) FGF21 inhibited the transcriptional expression of REBP-1c.
2.FGF21 does not play a role in sugar metabolism. It only inhibits the transcription of the key enzyme, the key enzyme, PEPCK gene, under the basic conditions.
3. porcine FGF21 encoding region of 627 BP, encoding 208 amino acids; the gene contains 3 exons and 2 introns, its genome structure and each exon genomic structure and length of human and mouse are similar to that of FGF21; FGF21 is widely expressed in tissues of pigs, especially in liver, fat the organization (including mesenteric adipose tissue, epididymal adipose tissue and subcutaneous adipose tissue) high expression and kidney metabolic organ.

【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R363

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1366385