本文關(guān)鍵詞：流動狀態(tài)下ADAMTS13羧基端的功能研究　出處：《華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)》2011年06期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 血管性血友病因子裂解酶 突變體 剪切力 流動小室

【摘要】：目的研究ADAMTS13及其突變體于體外流動狀態(tài)下裂解血管性血友病因子(VWF),降低血小板粘附形成血栓能力的差異。方法將全長ADAMTS13(FL)及缺失TSP2-8CUB1+2(MDTCS)和缺失CUB1+2(delCUB)cDNA質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染COS7細(xì)胞,Western blot檢測各瞬時表達(dá)細(xì)胞分泌的蛋白。利用流體力學(xué)裝置平板流動小室(FlowChamber)培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,并通過蠕動泵加壓流動培養(yǎng)液模擬人體血管內(nèi)流動狀態(tài),熒光顯微鏡觀測加入AD-AMTS13或其突變體蛋白后熒光標(biāo)記的血小板聚集狀態(tài)的差異。結(jié)果成功在真核表達(dá)細(xì)胞內(nèi)瞬時表達(dá)ADAMTS13及其突變體蛋白,簡單純化并經(jīng)Western blot檢測各表達(dá)蛋白相對分子量與預(yù)期一致。Flow Chamber模擬人體血管內(nèi)剪切力作用下,FL蛋白和MDTCS蛋白可以不同程度地抑制血小板凝集,delCUB蛋白抑制血小板凝集的能力顯著下降。結(jié)論成功瞬時表達(dá)全長ADAMTS13及其突變體蛋白。初步證實流動狀態(tài)下ADAMTS13羧基端是參與裂解VWF以抑制血小板凝集的主要區(qū)域。
[Abstract]:Objective to study the effect of ADAMTS13 and its mutant on VWF in vitro. Methods to reduce the thrombotic ability of platelet adhesion. Methods the full-length ADAMTS13FLL and the deletion of TSP2-8CUB1 2 MDTCSs and CUB1 2 (2) were used to reduce the thrombotic ability of platelets. DelCUB)cDNA plasmid was transiently transfected into COS7 cells. Human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were cultured by Western blot. The flow state of human blood vessel was simulated by using peristaltic pump pressurized flow medium. Fluorescence microscope was used to observe the difference of platelet aggregation after adding AD-AMTS13 or its mutant protein. Results the transient expression of ADAMTS13 and its mutation in eukaryotic expression cells were successful. Body protein. Simple purification and detection of the relative molecular weight of the expressed proteins by Western blot. Flow Chamber simulated human intravascular shear stress. FL protein and MDTCS protein can inhibit platelet agglutination to some extent. Conclusion the transient expression of full-length ADAMTS13 and its mutant protein was successfully achieved. It was preliminarily confirmed that the carboxyl terminal of ADAMTS13 in mobile state is. Participate in the lysis of VWF to inhibit the main areas of platelet agglutination.
【作者單位】： 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院婦產(chǎn)科;鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖中心;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(No.30671093,No.30672243)
【分類號】：R554.6
【正文快照】： 血管性血友病因子裂解酶(A disintegrin andmetalloproteinase with thrombospondin motif 13,ADAMTS13,即von Willebrand factor-cleavingprotease,VWF-cp)是由Furlan[1]和Tsai[2]等在研究血管性血友病因子(von Willebrand factor,VWF)的生理特性時,從正常人血漿中純化的一

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本文編號：1365748