本文關鍵詞：惡性瘧原蟲二氫乳清酸脫氫酶抑制劑體外誘導惡性瘧原蟲耐藥的實驗研究　出處：《中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志》2017年04期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的分析惡性瘧原蟲二氫乳清酸脫氫酶(Plasmodium falciparum dihydroorotate dehydrogenase,PfDHODH)抑制劑(二氫噻吩酮類化合物,編號50,以下簡稱PfDHODH抑制劑50)對體外培養(yǎng)惡性瘧原蟲的作用特點及其誘導耐藥的可能機制。方法惡性瘧原蟲氯喹敏感株(3D7株)和氯喹抗性株(Dd2株)同步化培養(yǎng)后分為不加藥對照組、環(huán)狀體期加藥組和大滋養(yǎng)體期加藥組,藥物終濃度為80 nmol/L。分別在同步化后0 h(環(huán)狀體期)、24 h(大滋養(yǎng)體期)、42 h涂薄血膜片鏡檢;通過逐步加大藥物濃度的方法,體外誘導產(chǎn)生耐藥蟲株,3個月后經(jīng)有限稀釋培養(yǎng),獲得單克隆耐藥蟲株。采用SYBR GreenⅠ染料法檢測各耐藥蟲株對PfDHODH抑制劑50、氯喹和青蒿素的半數(shù)抑制濃度(IC_(50));PCR擴增各耐藥蟲株Pfdhodh基因并測序,分析其突變情況。結(jié)果與不加藥對照組相比,環(huán)狀體期加藥組惡性瘧原蟲從滋養(yǎng)體到裂殖體的發(fā)育受到明顯抑制,大滋養(yǎng)體期加藥組惡性瘧原蟲呈現(xiàn)明顯的空泡化,核質(zhì)密度大大降低。通過體外誘導并經(jīng)有限稀釋培養(yǎng),獲得44株PfDHODH抑制劑50的單克隆耐藥蟲株,其中,母本為Dd2、3D7的耐藥蟲株分別為24和20株,它們對PfDHODH抑制劑50的IC_(50)分別為(2.284±0.096)和(0.678±0.018)μmol/L,較母本蟲株的(0.018±0.002)和(0.015±0.002)μmol/L分別提高了近130倍和50倍;對氯喹和青蒿素的IC_(50)分別為(0.011±0.002)、(0.014±0.004)和(0.013±0.003)、(0.012±0.001)μmol/L;與母本Dd2蟲株相比,Dd2耐藥蟲株對氯喹的IC_(50)從(0.072±0.002)μmol/L下降為(0.011±0.002)μmol/L。測序分析結(jié)果顯示,23株Dd2來源的耐藥蟲株PfDHODH蛋白氨基酸序列發(fā)生了G181D的點突變,另有1株除G181D的點突變外,還產(chǎn)生了K32N的點突變;3D7來源的耐藥蟲株未發(fā)現(xiàn)相應突變。結(jié)論體外誘導獲得PfDHODH抑制劑50的單克隆耐藥蟲株,G181D的點突變可能是導致惡性瘧原蟲高水平耐受PfDHODH抑制劑50的重要分子機制。
[Abstract]:Objective to analyze Plasmodium falciparum dihydroorotate dehydrogenase of Plasmodium falciparum dihydroorotate. PfDHODH) inhibitor (dihydrothiophenone compounds, No. 50). The effect of PfDHODH inhibitor 50 on in vitro culture of Plasmodium falciparum and its possible mechanism of inducing drug resistance. Methods Plasmodium falciparum chloroquine sensitive strain 3D7 and chloroquine resistant strain (chloroquine resistant strain). Dd2 strain was divided into control group after synchronous culture. The final concentration of the drug was 80 nmol / L in the cyclomeric and trophoblastic groups, respectively, at 0 h (24 h) after synchronization (macrotrophoblastic phase). 42 h thin blood membrane examination; By increasing drug concentration step by step, drug-resistant strains were induced in vitro and cultured in limited dilution after 3 months. SYBR Green 鈪，

本文編號：1361697