本文關(guān)鍵詞：美洲鉤蟲廣譜絲氨酸蛋白酶抑制劑NaKuI3的鑒定及特性研究　出處：《中國病原生物學(xué)雜志》2017年06期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的原核表達美洲鉤蟲(Necator americanus)絲氨酸蛋白酶抑制劑NaKuI3,檢測其對絲氨酸蛋白酶的抑制活性。方法根據(jù)美洲鉤蟲序列(GenBank No.XM_013451492)設(shè)計引物,以美洲鉤蟲成蟲cDNA為模板,通過SMART-RACE方法相繼分離NaKuI3的3'和5'cDNA末端序列;構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pET32a-sumo/NaKuI3,將其轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達并用Ni-NTA親和純化和SUMO酶酶切獲得rNaKuI3,用發(fā)色底物法檢測rNaKuI3對絲氨酸蛋白酶的抑制活性。結(jié)果成功從美洲鉤蟲中獲得了新的Kunitz型絲氨酸蛋白酶抑制劑-NaKuI3全長cDNA,推測其完整閱讀框(ORF)為225bp,編碼74個氨基酸殘基組成的多肽,具有19個氨基酸殘基組成的信號肽。rNaKuI3對豬胰蛋白酶、人纖溶酶、人中性粒細胞彈性蛋白酶和人蛋白酶3均有較強抑制作用,抑制常數(shù)(ki)分別為(16.40±2.08)nmol、(24.39±4.25)nmol、(38.39±3.92)nmol和(89.90±13.91)nmol,對人組織蛋白酶G也具有一定抑制活性,但對牛α-胰糜蛋白酶、豬胰彈性蛋白酶抑制作用較弱。結(jié)論融合蛋白美洲鉤蟲NaKuI3獲得成功。該多肽對多種絲氨酸蛋白酶有抑制作用,是一種廣譜的絲氨酸蛋白酶抑制劑,為進一步研究NaKuI3的生理學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to express NaKuI3, a serine protease inhibitor, in prokaryotic expression of Necator americanus. Methods Primer was designed according to GenBank No. XM013451492. Using the adult cDNA of hookworm as template, the 3 'and 5' cDNA terminal sequences of NaKuI3 were isolated by SMART-RACE method. The recombinant expression plasmid pET32a-sumo-Na KuI3 was constructed and transformed into Escherichia coli BL21 (DE3). RNaKuI3 was induced by IPTG and purified by Ni-NTA affinity and digested by SUMO. The inhibitory activity of rNaKuI3 on serine protease was detected by chromogenic substrate method. Results A novel Kunitz type serine protease inhibitor -NaKuI3 was successfully obtained from hookworm. NA. Its complete reading frame ORF is 225bp, encoding a peptide composed of 74 amino acid residues and a signal peptide with 19 amino acid residues. RNaKuI3 pair of porcine trypsin. Human fibrinolytic enzyme, human neutrophil elastase and human protease 3 had strong inhibitory effects, and the inhibition constant was 16.40 鹵2.08 nmol, respectively. The activity of human cathepsin G was also inhibited by 24.39 鹵4.25nmol (38.39 鹵3.92nmol) and 89.90 鹵13.91nmol (P < 0.05). But the inhibitory effect on bovine 偽 -chymotrypsin and porcine pancreatic elastase was weak. Conclusion the fusion protein NaKuI3 is successful, and the polypeptide can inhibit many serine proteases. It is a broad-spectrum serine protease inhibitor, which lays a foundation for the further study of the physiological function of NaKuI3.
【作者單位】： 廣東醫(yī)科大學(xué)寄生蟲學(xué)教研室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(No.81171599) 廣東省教育廳重點科研項目-特色創(chuàng)新類(No.2015KTSCX050) 廣東醫(yī)科大學(xué)科研基金項目(No.M2014004)
【分類號】：R383.13
【正文快照】： 絲氨酸蛋白酶抑制劑廣泛存在于植物、動物、病毒和微生物中,通過調(diào)節(jié)絲氨酸蛋白酶的活性參與許多重要生理反應(yīng),如消化、血液凝固、纖維蛋白溶解、炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答、信號傳導(dǎo)等[1]。近年來研究較多的絲氨酸蛋白酶抑制劑是Kunitz型絲氨酸蛋白酶抑制劑(Kunitz type serine pro

【參考文獻】

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3 劉廣花;鄧莉;彭禮飛;;蛋白酶3及其與疾病的關(guān)系研究進展[J];生物化學(xué)與生物物理進展;2015年03期

4 鄧振;何慶豐;彭禮飛;;中性粒細胞絲氨酸蛋白酶及其抑制劑與炎癥[J];中國藥理學(xué)通報;2014年03期

【共引文獻】

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2 陳駒;彭禮飛;;組織蛋白酶G在炎癥性疾病發(fā)生發(fā)展中作用的研究進展[J];山東醫(yī)藥;2017年21期

3 白小崗;龐靜;呼雙琴;李偉;;維生素E治療早期糖尿病足的臨床效果及對氧化應(yīng)激反應(yīng)和炎癥指標的影響[J];中國醫(yī)藥導(dǎo)報;2017年06期

4 王利玲;吳強鵬;程黎;;抗菌肽LL-37激活嗜酸性粒細胞釋放炎性遞質(zhì)對哮喘的發(fā)病機制研究[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報;2017年01期

5 徐海聲;寧四清;;中性粒細胞彈性蛋白酶與結(jié)腸癌肝、肺轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J];實用癌癥雜志;2016年09期

6 趙桂東;曲燕;;硫辛酸治療早期糖尿病足的臨床療效及對氧化應(yīng)激反應(yīng)和炎癥指標的影響[J];醫(yī)學(xué)綜述;2016年18期

7 李少金;邵正;司徒永立;彭禮飛;鄧莉;;鞭蟲乳清酸蛋白TtWAP-3的原核表達、純化及其活性研究[J];中國病原生物學(xué)雜志;2016年07期

8 安映紅;袁守軍;;tuftsin及其衍生物T肽的抗癌作用研究進展[J];中國藥理學(xué)通報;2016年06期

9 李強;鄭穎;羊慧君;黃康;;基線血漿基質(zhì)金屬蛋白酶-1含量與冠狀動脈造影術(shù)患者全死因死亡率的相關(guān)性分析[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2016年03期

10 陳健文;張仁偉;溫?zé)樈?黎思彤;劉翠;劉培慶;李民;;國產(chǎn)烏司他丁對絲氨酸蛋白酶抑制效果的體外研究[J];中國生化藥物雜志;2015年08期

【二級參考文獻】

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1 劉廣花;鄧莉;彭禮飛;;蛋白酶3及其與疾病的關(guān)系研究進展[J];生物化學(xué)與生物物理進展;2015年03期

2 鄧振;何慶豐;彭禮飛;;中性粒細胞絲氨酸蛋白酶及其抑制劑與炎癥[J];中國藥理學(xué)通報;2014年03期

3 殷環(huán);鄧莉;王會蘭;吳亞敏;彭禮飛;;犬鉤蟲抗凝肽AcaNAP8的原核表達及其抗凝活性[J];中國熱帶醫(yī)學(xué);2010年07期

4 康濤;劉東;劉運寶;殷環(huán);練有文;劉文;彭禮飛;;重組線蟲抗凝蛋白rAcaNAP9抗大鼠血栓的效果觀察[J];廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2010年02期

5 彭禮飛;鄧莉;楊陳;胡晶晶;甘偉瓊;吳亞敏;付漢維;;十二指腸鉤蟲抗凝蛋白AduNAP7的原核表達、純化及抗凝活性鑒定[J];中國人獸共患病學(xué)報;2007年10期

6 彭禮飛;楊陳;王會蘭;吳亞敏;鄧莉;吳鐵;胡晶晶;;線蟲抗凝血蛋白AcaNAP7基因克隆、表達及抗凝活性鑒定[J];中國藥理學(xué)通報;2007年03期

7 彭禮飛;王會蘭;鄧莉;戴世忠;;鉤蟲抗凝血肽的研究現(xiàn)狀[J];廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2006年06期

8 李暉;彭禮飛;;寄生線蟲絲氨酸蛋白酶抑制劑研究進展[J];國際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志;2011年06期

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3 孫德建;;收集美洲鉤蟲幼蟲的簡便方法[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊);1990年01期

4 葉小平,孫鳳華,錢益新,梅火根;美洲鉤蟲和蛔蟲感染人群的蟲負荷數(shù)與排卵量的關(guān)系[J];中國血吸蟲病防治雜志;1993年02期

5 ;人體美洲鉤蟲在小白鼠體內(nèi)的部分發(fā)育[J];國外醫(yī)學(xué)參考資料(寄生蟲病分冊);1974年01期

6 王立德;;美洲鉤蟲和貓鉤蟲第三期幼蟲食道腺的超微結(jié)構(gòu)的比較[J];國外醫(yī)學(xué)參考資料(寄生蟲病分冊);1976年06期

7 李德發(fā);;胃液抽取發(fā)現(xiàn)活美洲鉤蟲一例[J];廣西赤腳醫(yī)生;1978年01期

8 蔣華;美洲鉤蟲在幼兔體內(nèi)完全發(fā)育及宿主血清球蛋白測定[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊);1981年04期

9 蔣華;母乳傳染人體美洲鉤蟲的觀察[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊);1982年04期

10 陳祖澤;;美洲鉤蟲在乳兔體內(nèi)完成發(fā)育和感染后體液抗體、白細胞反應(yīng)及血清蛋白的改變[J];廣東衛(wèi)生防疫資料;1982年02期

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本文編號：1359174