本文關(guān)鍵詞：鼠肝缺血再灌注損傷后膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)體Bsep與Mrp2的表達(dá)及意義　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:探討大鼠肝臟缺血再灌注損傷(I/R)后膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)體Bsep與Mrp2的表達(dá)及意義 方法:健康的雄性Sprague-Dawley(S-D)大鼠60只隨機(jī)分為兩組(每組30只):A組為對(duì)照組,進(jìn)腹后僅解剖第一肝門,不行第一肝門阻斷;B組為缺血再灌注組,解剖第一肝門,并用沙氏鉗夾閉第一肝門,造成門靜脈、肝動(dòng)脈和膽總管的完全阻斷,阻斷30min后開放,恢復(fù)入肝血流。分別于術(shù)后1h、6h、12h、1d、3d開腹,每個(gè)預(yù)定時(shí)相點(diǎn)取5只大鼠進(jìn)行取材和指標(biāo)檢測(cè),應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清ALT、DBIL、TBA的含量,應(yīng)用HE染色方法檢測(cè)各組大鼠肝組織病理學(xué)改變,應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP(Streptavidin-perosidase)法和實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Real time Reverse Transcriptase-PCR)技術(shù),檢測(cè)各組大鼠肝組織中的Bsep與Mrp2蛋白和mRNA表達(dá)情況。 結(jié)果:①TBA、DBIL、ALT:A組大鼠各時(shí)相點(diǎn)血清TBA、DBIL、ALT含量無明顯差別(P0.05)。B組大鼠缺血再灌注后1h、6h、12h、1d血清中TBA、DBIL、ALT的含量明顯升高,較之A組各對(duì)應(yīng)時(shí)相點(diǎn)具有明顯差別(P0.05);再灌注后3d,血清中TBA、DBIL、ALT含量與A組比較無明顯差別(P0.05)。②病理學(xué)改變:A組大鼠術(shù)后1h-3d肝細(xì)胞形態(tài)正常,均無肝細(xì)胞壞死。B組大鼠缺血再灌注術(shù)后1h改變較輕,肝細(xì)胞輕度水腫;再灌注術(shù)后6h、12h、1d、3d可見肝細(xì)胞水腫明顯,脂質(zhì)沉積,細(xì)胞核增大、稍深染,并可見核分裂相,但各時(shí)相點(diǎn)均未見肝細(xì)胞壞死的發(fā)生。③RT-PCR結(jié)果:A組大鼠術(shù)后1h、6h、12h、1d、3d各時(shí)相點(diǎn)肝組織中Bsep mRNA的含量無明顯差別(P0.05);B組大鼠缺血再灌注術(shù)后1h、6h、12h、1d,肝組織中Bsep mRNA含量減少,與A組各對(duì)應(yīng)時(shí)相點(diǎn)比較有顯著差別(P0.05),術(shù)后3d兩組肝組織中Bsep mRNA的表達(dá)無顯著差別(P0.05)。A組大鼠術(shù)后1h、6h、12h、1d、3d各時(shí)相點(diǎn)肝組織中Mrp2 mRNA的含量無明顯差別(P0.05);B組大鼠缺血再灌注術(shù)后1h、6h、12h,肝組織中Mrp2 mRNA含量減少,與A組各對(duì)應(yīng)時(shí)相點(diǎn)比較有顯著差別(P0.05),術(shù)后1d、3d兩組肝組織中Mrp2 mRNA的表達(dá)無明顯差別(P0.05)。④免疫組化結(jié)果:A組大鼠在術(shù)后的1h、6h、12h、1d、3d,肝組織中Bsep、Mrp2蛋白在肝細(xì)胞膜上規(guī)則表達(dá),顯露出肝細(xì)胞輪廓,胞漿內(nèi)未見棕黃染色。B組大鼠在缺血再灌注后的1h、6h、12h、1d,肝組織中Bsep蛋白在肝細(xì)胞膜上表達(dá)不規(guī)則,染色稀疏,與A組對(duì)應(yīng)各時(shí)相點(diǎn)比較明顯下調(diào),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X~2=7.33、X~2=10.00、X~2=10.00和X~2=7.00,P0.05),以術(shù)后6h下調(diào)最為顯著(P0.01),且胞漿內(nèi)均未見棕黃染色;再灌注后3d,Bsep蛋白在兩組中的表達(dá)無明顯差別(X~2=2.50,P0.05)。B組大鼠在缺血再灌注后的1h、6h、12h,1d,肝組織中Mrp2蛋白在肝細(xì)胞膜上表達(dá)稀疏,散亂,并可見胞漿內(nèi)棕黃染色,與A組對(duì)應(yīng)各時(shí)相點(diǎn)比較明顯下調(diào),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X~2=10.00、X~2=10.00、X~2=10.00和X~2=7.00,P0.05);同時(shí)胞漿內(nèi)可見棕黃染色,Mrp2蛋白在胞漿內(nèi)散在分布,與對(duì)應(yīng)A組各時(shí)相點(diǎn)比較有顯著差別(X~2=10.00、X~2=8.00、X~2=6.67和X~2=8.00,P0.05),再灌注后3d,兩組肝組織中Mrp2蛋白重新表達(dá)分布在肝細(xì)胞膜上,顯露肝細(xì)胞輪廓,在兩組中的表達(dá)無明顯差別(X~2=0.40,P0.05)。 結(jié)論:大鼠肝臟缺血再灌注損傷(I/R)后肝組織中Bsep表達(dá)下調(diào)和Mrp2定位異常可能是鼠肝缺血再灌注損傷后高膽紅素血癥發(fā)生的重要機(jī)制。
[Abstract]:Objective : To investigate the expression and significance of bile acid transporter BR and Mr p2 in rat liver after ischemia / reperfusion injury ( I / R ) . Methods : Sixty - six healthy male Sprague - Dawley ( S - D ) rats were randomly divided into two groups ( 30 rats in each group ) : group A was the control group , and only the first hepatic portal was dissected and the first hepatic portal was not blocked .


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