本文關(guān)鍵詞：埃博拉病毒核蛋白抗體間接ELISA檢測(cè)方法的建立　出處：《中國(guó)病原生物學(xué)雜志》2017年01期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的建立快速而準(zhǔn)確的檢測(cè)蝙蝠埃博拉病毒(EBOV)核蛋白抗體ELISA方法。方法合成大腸埃希菌系統(tǒng)密碼子優(yōu)化的扎伊爾埃博拉病毒核蛋白羧基端序列,構(gòu)建含His標(biāo)簽的原核表達(dá)載體pET-28(a)-Z-NP,并轉(zhuǎn)化BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞,用1.0mmol/L IPTG誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白,目的蛋白經(jīng)親和層析純化后進(jìn)行SDS-PAGE和Western blot鑒定,以純化蛋白為包被抗原建立抗體間接ELISA方法。結(jié)果成功構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28(a)-Z-NP,可溶表達(dá)的目的蛋白純化后經(jīng)Western blot檢測(cè),能與His單抗和已知陽(yáng)性血清特異性反應(yīng)。建立的ELISA方法檢測(cè)輪狀病毒、來(lái)賓病毒、漢城病毒、玄松病毒感染蝙蝠血清均無(wú)交叉反應(yīng),已知陽(yáng)性血清稀釋至1∶1 600仍為陽(yáng)性,試驗(yàn)的批內(nèi)及批間變異系數(shù)均10%。用此方法檢測(cè)采自云南省西雙版納地區(qū)的15份棕果蝠血清,其中2份陽(yáng)性,且與Western blot驗(yàn)證結(jié)果一致。結(jié)論建立的間接ELISA方法具有較高的敏感性和特異性,可用于蝙蝠扎伊爾埃博拉病毒核蛋白抗體的檢測(cè)。
[Abstract]:Objective to establish a rapid and accurate method for the detection of bat Ebola virus (EBOV). Methods the nucleoprotein ELISA method was used to synthesize the carboxyl terminal sequence of Zairian Ebola virus nucleoprotein from Escherichia coli. His tagged prokaryotic expression vector pET-28AL-Z-NPs was constructed and transformed into BL21DE3) -receptive cells. The target protein was induced by 1.0 mmol / L IPTG. The target protein was purified by affinity chromatography and identified by SDS-PAGE and Western blot. Indirect ELISA method was established with purified protein as coating antigen. Results the prokaryotic expression plasmid pET-28(a)-Z-NP was successfully constructed. After purification of the soluble expressed target protein, Western blot was used to detect the specific reaction with His monoclonal antibody and known positive serum. The established ELISA method was used to detect rotavirus and guest virus. There was no cross reaction in the sera of bats infected with Seoul virus and Hyun Sung virus. The known positive serum diluted to 1: 1 600 was still positive. This method was used to detect 15 samples of Rhinolophus rubrum serums collected from Xishuangbanna area of Yunnan Province, of which 2 were positive. Conclusion the indirect ELISA assay has high sensitivity and specificity, and can be used for the detection of nuclear protein antibodies against Ebola virus in bats and Zaire.
【作者單位】： 吉林大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所吉林省人獸共患病防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(No.31572529) 中國(guó)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院青年創(chuàng)新基金項(xiàng)目(No.2015CXJJ28)
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 埃博拉病毒(Ebolavirus)是世界上公認(rèn)的致命的病毒之一,由于其引起的疾病-埃博拉出血熱(EbolaHemorrhagic Fever)對(duì)人具有高度的傳染性和致死性,所以世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)將其列為潛在的生物戰(zhàn)劑之一[1]。埃博拉病毒屬于單股負(fù)鏈RNA病毒目(Mononegavir

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3 孫玉蘭,李德新;埃博拉病毒結(jié)構(gòu)蛋白研究進(jìn)展[J];中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志;2004年04期

4 ;干擾埃博拉病毒繁殖突破性進(jìn)展[J];臨床合理用藥雜志;2010年12期

5 ;美科學(xué)家揭開(kāi)埃博拉病毒之謎[J];生物學(xué)教學(xué);2014年01期

6 卞文;埃博拉病毒肆虐[J];國(guó)外科技動(dòng)態(tài);1996年11期

7 ;何謂埃博拉病毒[J];山西教育;2001年10期

8 楊世誠(chéng);前度“劉愞”今又來(lái)——埃博拉病毒的來(lái)龍去脈[J];百科知識(shí);2001年02期

9 李瀟;埃博拉病毒糖蛋白致命之謎[J];生物化學(xué)與生物物理學(xué)報(bào);2001年01期

10 聶福平;范泉水;王靈強(qiáng);郄翠仙;郭松輝;龍貴偉;李麗紅;張念祖;;埃博拉病毒的研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2006年10期

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2 張振清;袁志明;;卡爾扎伊型埃博拉病毒的重組病毒疫苗研究[A];2013年湖北省暨武漢微生物學(xué)會(huì)會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2013年

3 夏咸柱;;野生動(dòng)物疫病與公共衛(wèi)生[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)養(yǎng)犬學(xué)分會(huì)第十二次全國(guó)養(yǎng)犬學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2007年

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3 王文成;埃博拉病毒加速大型類人猿滅亡[N];新華每日電訊;2005年

4 王雯婷;埃博拉病毒扯動(dòng)世界[N];人民日?qǐng)?bào)海外版;2014年

5 杜鵑;埃博拉病毒六問(wèn)[N];新華每日電訊;2014年

6 本報(bào)記者 項(xiàng)錚;我國(guó)三道防線嚴(yán)防埃博拉病毒[N];科技日?qǐng)?bào);2014年

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8 記者 王玉鳳;埃博拉病毒“復(fù)活” 全球嚴(yán)防[N];第一財(cái)經(jīng)日?qǐng)?bào);2014年

9 張忠霞;埃博拉病毒為何難降服[N];健康報(bào);2014年

10 徐蔚冰;埃博拉病毒離我們有多遠(yuǎn)[N];中國(guó)經(jīng)濟(jì)時(shí)報(bào);2014年

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2 王欽欽;針對(duì)柯薩奇病毒和埃博拉病毒的藥物篩選及活性研究[D];安徽大學(xué);2016年

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5 吳曉鑫;埃博拉病毒GP蛋白單克隆抗體的篩選和制備[D];浙江大學(xué);2016年

6 蓋微微;致死型埃博拉病毒核酸和抗體檢測(cè)方法的建立[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

7 趙晨;埃博拉病毒糖蛋白的毒性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

8 張桂根;埃博拉病毒包膜蛋白GP細(xì)胞毒性機(jī)理研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

9 劉陽(yáng);熒光定量RT-PCR檢測(cè)埃博拉病毒方法的建立[D];黑龍江大學(xué);2012年

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