本文關(guān)鍵詞：NMDA受體NR2B亞基在嚴(yán)重創(chuàng)傷應(yīng)激大鼠下丘腦中的表達(dá)變化及初步機(jī)制研究　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：機(jī)體在嚴(yán)重創(chuàng)傷后，下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸(Hypothalamic-pituitary-adrenal，HPA)的激活通過(guò)分泌糖皮質(zhì)激素對(duì)免疫、炎癥反應(yīng)以及代謝的調(diào)節(jié)，對(duì)機(jī)體起著保護(hù)性作用。然而，過(guò)度而持久的HPA軸活化則可能會(huì)引起嚴(yán)重的繼發(fā)性傷害。多篇文獻(xiàn)報(bào)道了嚴(yán)重?zé)齻�、�?chuàng)傷及重癥患者糖皮質(zhì)激素持續(xù)性增高，并且與患者的預(yù)后密切相關(guān)。因此，如何防止HPA軸過(guò)度激活所導(dǎo)致的繼發(fā)性傷害就成為了臨床上治療嚴(yán)重創(chuàng)傷所需要解決的關(guān)鍵問(wèn)題。 谷氨酸及其離子型NMDA受體(N-methyl-D-aspartic acid，NMDA)參與了多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)生理和病理活動(dòng)如突觸可塑性，學(xué)習(xí)記憶，腦缺血，癲癇等。研究表明谷氨酸離子型NMDA受體尤其是NR2B亞基高度表達(dá)于下丘腦室旁核(Paraventricular nucleus，，PVN)及視上核神經(jīng)元中。隨著研究的深入， NR2B亞基對(duì)NMDA受體功能發(fā)揮及其在下丘腦PVN神經(jīng)元興奮性調(diào)節(jié)中的作用引起了學(xué)者的廣泛關(guān)注。 同時(shí)，在嚴(yán)重創(chuàng)傷后下丘腦室旁核神經(jīng)元釋放的促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(Corticotropin-releasing Hormone，CRH)及其受體的表達(dá)也明顯增高，在HPA軸活性調(diào)節(jié)及血液中糖皮質(zhì)激素的升高中發(fā)揮著十分重要的作用。此外有研究發(fā)現(xiàn)，急性應(yīng)激反應(yīng)能夠引起PVN神經(jīng)元NMDA受體亞基的表達(dá)發(fā)生變化，并且CRH可能對(duì)這一變化有著重要作用。但是，目前對(duì)于嚴(yán)重創(chuàng)傷后下丘腦NMDA受體亞基表達(dá)的變化及其在HPA軸活化狀態(tài)變化中的作用，以及作為應(yīng)激反應(yīng)中關(guān)鍵激素的CRH是否參與了嚴(yán)重創(chuàng)傷后NMDA受體亞基表達(dá)的調(diào)控，尚不十分清楚。 現(xiàn)用的創(chuàng)傷模型主要包括槍彈傷，爆炸傷，撞擊傷及燙傷，因槍彈傷，爆炸傷，撞擊傷對(duì)致傷條件及參數(shù)難以精確控制，所得到的動(dòng)物模型在損傷程度，損傷部位等不統(tǒng)一，不利于創(chuàng)傷后應(yīng)激反應(yīng)的研究。故本實(shí)驗(yàn)采取國(guó)際上常用的致傷部位及程度易控制的30％體表面積背腹部皮膚Ⅲ度燙傷模型為嚴(yán)重創(chuàng)傷模型。利用放射免疫法測(cè)定血清中皮質(zhì)醇濃度，反應(yīng)嚴(yán)重燙傷后大鼠HPA軸活性變化，并采用免疫組織化學(xué)及western印跡方法觀察大鼠下丘腦組織NMDA受體NR1，NR2B亞基表達(dá)變化。此外，為了進(jìn)一步證實(shí)CRH對(duì)嚴(yán)重燙傷后大鼠下丘腦NMDA受體NR1，NR2B表達(dá)的調(diào)控作用，采取大鼠側(cè)腦室內(nèi)置管注射的方法，觀察不同濃度的CRH及其拮抗劑CP154,526對(duì)大鼠NR2B亞基表達(dá)水平的影響，分別運(yùn)用了RT-PCR及免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)了NMDA受體NR1及NR2B的RNA及蛋白表達(dá)水平。 主要結(jié)果及結(jié)論如下： 1.嚴(yán)重燙傷后大鼠血清皮質(zhì)醇濃度升高，在燙傷后6h時(shí)最明顯，傷后48h仍然維持在較高的濃度，而這一作用可以被CRH受體1拮抗劑CP154,526和NMDA受體拮抗劑MK-801部分拮抗。在注射CP154,526和MK-801組血清皮質(zhì)醇濃度較6h時(shí)明顯下降。血清皮質(zhì)醇濃度升高反應(yīng)在側(cè)腦室注射CRH時(shí)也同樣出現(xiàn)。與正常生理鹽水組大鼠血清皮質(zhì)醇濃度44.5±4.6ng/ml相比較，側(cè)腦室注射注射CRH后血清皮質(zhì)醇的含量明顯增加199.5±18.4ng/ml，并且隨著CRH濃度增高而升高，而CP-154,526能夠拮抗這一反應(yīng)所拮抗。這就說(shuō)明CRH與NMDA受體信號(hào)通路可能在嚴(yán)重燙傷后HPA軸興奮持續(xù)性增高中發(fā)揮著重要的作用。 2.下丘腦免疫組織化學(xué)染色及western-bloting檢測(cè)結(jié)果顯示： NR1亞基在嚴(yán)重?zé)齻蟊磉_(dá)增加，尤其以24小時(shí)最為明顯，一直持續(xù)到48h。而在注射CP154,526組卻沒(méi)有明顯的增加。NR2B的表達(dá)出現(xiàn)了與NR1相反的結(jié)果，在6小時(shí)顯著減少，而后出現(xiàn)表達(dá)增加。同時(shí)，與傷后6h相比較注射CP154,526組NR2B的表達(dá)量增加。這就說(shuō)明嚴(yán)重燙傷后CRH的表達(dá)增加可能引起NR2B表達(dá)減少，而這一作用可以被CP154,526所逆轉(zhuǎn)，進(jìn)而說(shuō)明CRH對(duì)NR2B的下調(diào)可能是HPA軸興奮性升高的機(jī)制之一。 3.通過(guò)RT-PCR方法檢測(cè)了各組側(cè)腦室注藥后下丘腦NR2B的表達(dá)情況。與注射生理鹽水組，注射CP154,526組及CRH+CP154,526組下丘腦NR2B的表達(dá)沒(méi)有明顯的變化，但在低濃度及高濃度CRH組卻明顯下降，且有隨著CRH濃度升高而降低的趨勢(shì)。同時(shí)，為了進(jìn)一步闡明CRH對(duì)下丘腦NR1表達(dá)的影響，本實(shí)驗(yàn)也對(duì)下丘腦NR1的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)，與注射生理鹽水組相比較，注射CRH組NR1的表達(dá)沒(méi)有明顯的變化。進(jìn)一步的NR2B免疫組化染色結(jié)果也提示NR2B的表達(dá)隨著CRH的濃度升高而減少，說(shuō)明NR2B受到CRH的調(diào)控。 綜上所述，大鼠嚴(yán)重?zé)齻驨MDA受體亞基NR1及NR2B發(fā)生明顯變化。進(jìn)一步通過(guò)側(cè)腦室置管注藥的方法證實(shí)，CRH對(duì)NR1的表達(dá)無(wú)明顯調(diào)控作用，而對(duì)NR2B亞基的表達(dá)起著負(fù)性調(diào)控作用。結(jié)果提示，大鼠嚴(yán)重?zé)齻驝RH對(duì)NR2B的調(diào)控可能是應(yīng)激反應(yīng)啟動(dòng)和維持重要的重要中樞機(jī)制之一，抑制或阻斷CRH受體可能對(duì)過(guò)度應(yīng)激反應(yīng)的防治有著重要臨床意義。
[Abstract]:The activation of hypothalamic - pituitary - adrenal cortical axis ( HPA ) plays a protective role in immune , inflammatory reaction and metabolic regulation after severe trauma . However , excessive and lasting HPA axis activation may cause severe secondary injury . NMDA receptors ( NMDA ) are involved in physiological and pathological activities of central nervous system such as synaptic plasticity , learning memory , cerebral ischemia , epilepsy , etc . Studies have shown that NMDA receptors , especially NR2B subunit , are highly expressed in paraventricular nucleus ( PVN ) and supraoptic nucleus neurons . At the same time , the expression of corticotropin - releasing hormone and its receptor released by paraventricular nucleus neurons in the hypothalamic paraventricular nucleus after severe trauma plays an important role in the regulation of HPA axis activity and the increase of glucocorticoid in the blood . In order to further confirm the regulation of the expression of NMDA receptor NR1 and NR2B in the hypothalamus of rats after severe burn injury , the effects of the different concentrations on the expression of NMDA receptor NR1 and NR2B in rat hypothalamus were observed by radioimmunoassay . The main results and conclusions are as follows : Compared with normal saline group , the levels of serum cortisol increased by 199.5 鹵 18.4 ng / ml , and CP - 154,526 was able to antagonise this response . 2 . The results of immunohistochemistry and western - bloting test showed that the expression of NR2B increased after severe burns , especially in 24 hours . The expression of NR2B increased . At the same time , the expression of NR2B increased significantly after 6 hours . 3 . The expression of NR2B in hypothalamus was detected by RT - PCR . There was no obvious change in the expression of NR2B in the hypothalamus , but in low and high concentrations , the expression of NR2B in hypothalamus was significantly decreased . In conclusion , the NMDA receptor subunits NR1 and NR2B after severe burn in rats have changed significantly .

【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R338

【參考文獻(xiàn)】

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1 張?jiān)茤|,朱佩芳,王正國(guó),周繼紅,許民輝,鄒詠文,黃顯凱,粟永萍,趙繼宗;大鼠嚴(yán)重創(chuàng)傷后早期下丘腦c-fos和CRH mRNA的表達(dá)[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2003年11期

2 于海明,王百忍,李改麗,鄺芳,段小莉,鞠躬;大鼠側(cè)腦室置管方法的改良[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2005年02期

3 劉志安,徐鐵軍,張鳳真,王梅申,彭裕文;NMDA受體亞單元NR2A和NR2B mRNA在缺血大鼠海馬的表達(dá)及其與細(xì)胞凋亡的關(guān)系[J];中國(guó)神經(jīng)科學(xué)雜志;2004年02期

本文編號(hào)：1356278