本文關(guān)鍵詞：小鼠腹腔B1細(xì)胞一氧化氮（NO）依賴性殺菌機(jī)制研究　出處：《第四軍醫(yī)大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：關(guān)于B1細(xì)胞的特性和功能等的研究一直是近10年來免疫學(xué)領(lǐng)域的重要課題。B細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要組成部分,目前研究認(rèn)為B細(xì)胞至少分為B1和B2兩個(gè)細(xì)胞亞群,其中位于腹腔的B1細(xì)胞具有天然免疫細(xì)胞的特性,表達(dá)吞噬相關(guān)表面標(biāo)記Mac-1、F4/80等分子,在抗感染等天然免疫應(yīng)答中具有重要的作用。本實(shí)驗(yàn)組前期實(shí)驗(yàn)工作中發(fā)現(xiàn)小鼠腹腔B1細(xì)胞可以吞噬金黃葡萄球菌,并具有清除細(xì)菌和真菌感染的作用。專職吞噬細(xì)胞的殺菌機(jī)制有兩方面,其中一方面通過溶酶體內(nèi)的酶來殺滅病原體,另一方面是氧化殺菌機(jī)制,就是通過呼吸爆發(fā)產(chǎn)生NO等氧自由基,來殺滅病原體。關(guān)于小鼠腹腔B1細(xì)胞吞噬殺菌過程中是否存在氧化殺菌機(jī)制尚不清楚,為進(jìn)一步闡釋NO在B1細(xì)胞殺菌過程中的作用,本實(shí)驗(yàn)對(duì)其機(jī)制進(jìn)行了初步研究。 目的:本實(shí)驗(yàn)旨在通過體外實(shí)驗(yàn)取小鼠腹腔B1細(xì)胞與金黃葡萄球菌(SA)共培養(yǎng),檢測一氧化氮(NO)合成量,誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)及相關(guān)細(xì)胞因子mRNA的表達(dá)。觀察經(jīng)氨基胍(AG)體外抑制iNOS功能后細(xì)胞內(nèi)SA的存活率,探討小鼠腹腔B1細(xì)胞殺菌機(jī)制中NO的作用。 方法:(1)取C57BL/6小鼠的腹腔灌洗液細(xì)胞及脾臟細(xì)胞,以PE/Cy5-rat anti mouse CD19及親和素標(biāo)記的磁珠進(jìn)行免疫磁珠分選,最終得到腹腔CD19+細(xì)胞(B1細(xì)胞)和腹腔CD19-細(xì)胞(巨噬細(xì)胞)。將磁珠分選得到的細(xì)胞分別行流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測磁珠分選效率及與SA共培養(yǎng),檢測NO合成量的變化;(2)將上述磁珠分選得到的B1細(xì)胞與SA共培養(yǎng),提取總RNA行Real Time-PCR比較各組iNOS及相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)量;(3)將上述磁珠分選得到的B1細(xì)胞與SA共培養(yǎng),行AG體外抑制iNOS的功能,觀察細(xì)胞內(nèi)SA的存活率。 結(jié)果:(1)流式結(jié)果發(fā)現(xiàn)磁珠分選B1細(xì)胞效率較高,B1細(xì)胞與金葡菌共培養(yǎng)后,用硝酸還原酶法檢測,發(fā)現(xiàn)NO的產(chǎn)生量與對(duì)照組相比明顯增加,NO合成量與共培養(yǎng)時(shí)間成正比例;(2)Real Time-PCR檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)SA誘導(dǎo)刺激后不同時(shí)間點(diǎn)B1細(xì)胞iNOSmRNA的表達(dá)量明顯升高,IL-4、IL-10的表達(dá)量與對(duì)照組相比明顯降低,TNF-α、IFN-γ的表達(dá)量與對(duì)照組相比明顯升高;(3)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)AG體外抑制iNOS功能后,細(xì)胞內(nèi)SA菌的存活率明顯高于未加氨基胍組。 結(jié)論:小鼠腹腔B1細(xì)胞體外經(jīng)金黃葡萄球菌誘導(dǎo)刺激后其NO合成量及iNOS表達(dá)量明顯升高,同時(shí)IL-4、IL-10、TNF-α、IFN-γ等細(xì)胞因子的mRNA表達(dá)水平發(fā)生明顯改變。經(jīng)氨基胍體外抑制iNOS功能后,細(xì)胞內(nèi)金黃葡萄球菌存活率明顯升高。說明小鼠腹腔B1細(xì)胞在接受外來抗原刺激時(shí)NO的合成量升高,iNOS特異性抑制劑可以明顯抑制其殺菌能力;提示小鼠腹腔B1細(xì)胞存在NO依賴的氧化殺菌機(jī)制。
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【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R392.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1353327