本文關(guān)鍵詞：重組質(zhì)粒pcDNA3.1-Ag85A對人單核細胞活性的影響　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:研究結(jié)核分枝桿菌分泌抗原85A(Antigen85A,Ag85A)重組真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1-Ag85A轉(zhuǎn)染人外周血單核細胞的特性,探討目的基因Ag85A能否在單核細胞表達,從而制備具有免疫活性的人外周血單核細胞。方法:分離人外周血單核細胞并進行原代培養(yǎng),流式細胞儀鑒定單核細胞純度; Ag85A重組真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1-Ag85A轉(zhuǎn)染單核細胞;RT-PCR檢測目的基因Ag85A在單核細胞中的表達,目的蛋白Ag85A的表達采用Western Blot鑒定。從外周血分離得到T淋巴細胞,與轉(zhuǎn)染后的單核細胞共同孵育,并設(shè)空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組、重組質(zhì)粒+單核細胞為對照組,3天后用MTT法檢測T淋巴細胞增殖情況。結(jié)果:人外周血單核細胞經(jīng)原代培養(yǎng)6天后,獲得大量高純度的單核細胞,流式細胞術(shù)鑒定人單核細胞表面特異性標(biāo)記CD14陽性的細胞高表達(98.35%);RT-PCR法鑒定表明Ag85A基因在轉(zhuǎn)染單核細胞中成功轉(zhuǎn)錄,Western Blot證實轉(zhuǎn)染后的單核細胞可合成目的蛋白Ag85A。與外周血T淋巴細胞共同孵育后,經(jīng)轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒的單核細胞相對對照組,有更強的刺激T淋巴細胞增殖的能力。結(jié)論:Ag85A重組真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1-Ag85A成功轉(zhuǎn)染人外周血單核細胞,目的基因Ag85A能在人單核細胞中的表達。經(jīng)轉(zhuǎn)染的外周血單核細胞有刺激外周血T淋巴細胞增殖能力,從而為結(jié)核病的疫苗的研制以及為患獲得性免疫缺陷病的結(jié)核病人的治療提供新途徑。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R392.1

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本文編號：1352360