發(fā)布時間：2017-12-29 08:25

  本文關(guān)鍵詞：細(xì)粒棘球絳蟲胰島素受體蛋白原核表達(dá)及其多克隆抗體制備　出處：《中國病原生物學(xué)雜志》2017年02期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 細(xì)粒棘球絳蟲 EgIR 蛋白表達(dá) 抗體制備

【摘要】：目的制備細(xì)粒棘球絳蟲胰島素受體(EgIR)蛋白的多克隆抗體,為進(jìn)一步研究EgIR蛋白的功能提供檢測抗體。方法利用Gamier-Robson、Chou-Fasman、DNAMAN等軟件預(yù)測EgIR蛋白抗原表位,進(jìn)行引物序列設(shè)計(jì)。將預(yù)測的EgIR基因部分序列克隆至原核表達(dá)載體pGEX-4T-1,轉(zhuǎn)化E.coli ROSETTA(DE3)株,IPTG誘導(dǎo)蛋白表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物EgIR蛋白經(jīng)谷胱甘肽瓊脂糖柱純化后注射免疫家兔10d,收集免疫血清,采用ELISA法測定抗體效價,采用Western blot檢測制備的多克隆抗體與EgIR蛋白的結(jié)合特性。結(jié)果構(gòu)建的原核表達(dá)載體轉(zhuǎn)化DE3后經(jīng)0.8mmol/L IPTG誘導(dǎo),成功表達(dá)約55ku的EgIR重組蛋白;目的蛋白純化后的濃度為3mg/ml,純度為85%;免疫家兔后收集的血清經(jīng)ELISA法檢測,抗體效價1∶51 200;Western blot檢測該抗體能與10、5、1ng/ml的EgIR重組蛋白特異結(jié)合,該抗體1∶1 000稀釋后仍可檢測到原頭蚴、囊泡蛋白樣品中的胰島素受體蛋白。結(jié)論成功制備兔抗EgIR亞基多克隆抗體,為EgIR蛋白的功能和藥物靶標(biāo)研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【作者單位】： 新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部臨床藥學(xué)科;新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)研究院新疆重大疾病醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室-省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.81560607,U1303222,81360251) 新疆重大疾病醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題資助項(xiàng)目(No.SKLIB-XJMDR-2012-2) 新疆維吾爾自治區(qū)包蟲病基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題(No.XJDX0202-2013-10)
【分類號】：R383.3
【正文快照】： 包蟲病是由棘球絳蟲(Echinococcus　granulosus,Eg)的中絳期幼蟲寄生在哺乳動物臟器內(nèi)引起的人畜共患寄生蟲病[1]。在我國,包蟲病主要分布于新疆、青海、四川、西藏等省(自治區(qū))的牧區(qū)[2]。胰島素受體家族是一種重要的多功能細(xì)胞調(diào)控因子,屬于受體酪氨酸激酶家族(Receptor　Ty

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4 高s，

本文編號：1349534