本文關(guān)鍵詞：重組大流行流感滅活疫苗（家蠶桿狀病毒）的檢定　出處：《浙江理工大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 禽流感疫苗 家蠶桿狀病毒 MALDI-TOF MS 免疫擴(kuò)散 疫苗檢定

【摘要】：重組大流行流感疫苗(家蠶桿狀病毒)是一種新型的基因工程禽流感疫苗。該疫苗是利用家蠶桿狀病毒表面展示技術(shù),將高致病性禽流感病毒A/Zhejiang/16/06(H5N1)株表面HA膜蛋白基因高效表達(dá)并將重組產(chǎn)物展示在家蠶桿狀病毒的囊膜表面,形成表面攜帶HA胞外結(jié)構(gòu)域的重組家蠶桿狀病毒。該重組病毒經(jīng)分離、純化、滅活后制成禽流感疫苗,免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后,能夠產(chǎn)生有效的中和抗體,在Balb/c小鼠、新西蘭大白兔、恒河猴動(dòng)物試驗(yàn)中已經(jīng)證實(shí)具有良好的安全性及免疫效果。因此,有望將該疫苗推向臨床試驗(yàn)。該創(chuàng)新疫苗由于沒有現(xiàn)成的國家標(biāo)準(zhǔn),需要根據(jù)實(shí)際情況自行制定合適的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本研究根據(jù)SFDA關(guān)于新生物制品生產(chǎn)規(guī)范的相關(guān)要求,對(duì)該疫苗進(jìn)行了檢定,為制定合適的疫苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提供參考。 我們將疫苗毒種Bmgp64HA在家蠶BmN細(xì)胞中進(jìn)行連續(xù)傳代培養(yǎng)30代,并提取各代病毒的基因組DNA進(jìn)行PCR鑒定。以融合基因上下游序列設(shè)計(jì)GP1和GP2一對(duì)引物進(jìn)行擴(kuò)增,結(jié)果發(fā)現(xiàn)1-10代病毒基因組的PCR結(jié)果均為陽性。DNA序列測(cè)定結(jié)果表明1-10代的病毒基因組中均含有完整的插入序列(GP-HA),與初始的GP-HA序列比對(duì)后未出現(xiàn)突變,可作為疫苗毒種工作種子批選定的參考。疫苗總蛋白的胰酶酶解樣品經(jīng)MALDI-TOF-MS進(jìn)行肽質(zhì)量指紋譜分析,通過高通量的肽質(zhì)量指紋圖譜對(duì)蛋白進(jìn)行鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與HA蛋白序列匹配的肽段有7條,序列覆蓋率為24%,這證明疫苗中含有HA蛋白,但是完成疫苗中HA全序列的鑒定還需要近一步的研究。血凝試驗(yàn)表明重組大流行流感疫苗(家蠶桿狀病毒)表面的HA蛋白具有活性,可以發(fā)生血凝反應(yīng),血凝滴度達(dá)1:16。用HA特異性抗體對(duì)疫苗樣品進(jìn)行Western Blotting鑒定,結(jié)果出現(xiàn)3個(gè)條帶。這與疫苗中的HA蛋白有HA、HA1和HA2這3種存在形式的預(yù)期相符。我們嘗試用SRID法、DOT-BLOT法和間接ELISA法測(cè)定疫苗中HA的含量。在本研究中,SRID法和DOT-BLOT法不能測(cè)定該疫苗中的HA含量,間接ELISA法測(cè)得的疫苗中HA含量為4.6‰。該疫苗的HA含量測(cè)定方法還有待完善。疫苗樣品經(jīng)透射電鏡觀察證明病毒顆粒的形狀。
[Abstract]:Recombinant pandemic influenza vaccine (silkworm baculovirus) is a new type of genetic engineering avian influenza vaccine. The vaccine is the use of the technology of silkworm baculovirus surface display, the highly pathogenic avian influenza virus (H5N1) strain A/Zhejiang/16/06 surface of the HA membrane protein gene expression and the recombinant product display capsule in silkworm baculovirus surface, forming a surface carrying the extracellular domain of HA recombinant Bombyx mori baculovirus. The recombinant virus was made into avian influenza vaccine after isolation, purification and inactivation. It can produce effective neutralizing antibodies after immunization of experimental animals. It has been proved to have good safety and immune effect in Balb/c mice, New Zealand white rabbits and Ganges RIver monkey animals. Therefore, it is expected to push the vaccine into clinical trials. Because of the lack of national standards, the innovative vaccine needs to develop the appropriate quality standards according to the actual situation. According to the relevant requirements of SFDA on the new biologics production specification, the vaccine was tested for the purpose of formulating the appropriate vaccine quality standard.
【學(xué)位授予單位】：浙江理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R392.1

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本文編號(hào)：1347143