本文關(guān)鍵詞：小鼠ES細(xì)胞向生殖細(xì)胞的誘導(dǎo)分化及體內(nèi)分化　出處：《西北農(nóng)林科技大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cells,ESCs)是來源于著床前囊胚內(nèi)層的細(xì)胞團(tuán)(Inner Cell Mass,ICM)或原始生殖細(xì)胞(PGCs)的一種未分化的細(xì)胞,具有自我更新、高度增殖和多向分化的潛能。胚胎干細(xì)胞在體外和體內(nèi)具有向三個(gè)胚層分化的能力,這一點(diǎn)已經(jīng)被廣泛證明。生殖系細(xì)胞的發(fā)生是目前生命科學(xué)研究的熱點(diǎn)課題。生殖細(xì)胞與其它體細(xì)胞相比具有獨(dú)特的生物學(xué)特性。但在哺乳動(dòng)物,生殖細(xì)胞發(fā)生、特化的具體時(shí)間和位置及其本質(zhì)生物學(xué)特性仍然是發(fā)育生物學(xué)界一直研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。 近年來,有關(guān)胚胎干細(xì)胞向生殖細(xì)胞分化的研究已有報(bào)道,但其誘導(dǎo)效率很低,如何提高其誘導(dǎo)效率尚存在很大困難,其次誘導(dǎo)方法也是備受關(guān)注的問題之一。本研究首先以本研究組構(gòu)建的攜帶Figlα啟動(dòng)子控制的報(bào)告載體(GFP)的小鼠胚胎干細(xì)胞(Figlα-ESCs)系為基礎(chǔ),采用卵母細(xì)胞提取液以及顆粒細(xì)胞共培養(yǎng)的方法誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞向雌性生殖細(xì)胞分化,嘗試為雌性生殖細(xì)胞的發(fā)生研究建立體外模型。然后以白消安構(gòu)建的小鼠生殖細(xì)胞發(fā)生缺損的模型為平臺(tái),體內(nèi)移植Figlα-ES細(xì)胞,探討其在體內(nèi)的分化潛能。 1.以魚類卵巢卵母細(xì)胞為材料制作卵細(xì)胞提取液,分別以添加10μg/mL、20μg/mL和50μg/mL三個(gè)不同濃度細(xì)胞提取液的培養(yǎng)液,誘導(dǎo)小鼠胚胎干細(xì)胞向生殖細(xì)胞定向分化,通過3 d和7 d的免疫熒光染色及熒光定量PCR檢測(cè)證明:在無飼養(yǎng)層條件下,添加提取液短期(3 d)培養(yǎng)ES細(xì)胞可維持其未分化形態(tài);延長(zhǎng)誘導(dǎo)時(shí)間到7 d時(shí),添加提取液組的部分細(xì)胞變大變圓,表達(dá)VASA、SCP3等生殖細(xì)胞和卵母細(xì)胞特異性標(biāo)記。 2.以魚類卵巢卵母細(xì)胞提取液與小鼠胚胎干細(xì)胞進(jìn)行破膜蛋白融合誘導(dǎo),7 d時(shí),未觀察到較為明顯的形態(tài)學(xué)變化,初步表明其可能沒有促進(jìn)ES細(xì)胞向生殖細(xì)胞分化的能力。 3.將小鼠胚胎干細(xì)胞以半透膜包被,移植到生殖缺陷模型小鼠腎被膜下,4 W后采樣,通過HE染色及免疫熒光染色證明,移植細(xì)胞在受體鼠內(nèi)可以存活,并在體內(nèi)微環(huán)境誘導(dǎo)下表達(dá)VASA、SCP3和Figlα等生殖細(xì)胞特異性標(biāo)記。
[Abstract]:Embryonic stem cells (ESCs) is an undifferentiated cell derived from the inner layer of pre implantation blastocyst (Inner Cell Mass, ICM) or primordial germ cell (PGCs), and has the potential of self renewal, high proliferation and multiple differentiation. Embryonic stem cells have the ability to differentiate into three germ layers in vitro and in vivo, which has been widely proved. The generation of germ line cells is a hot topic in the research of life science. Germ cells have unique biological characteristics compared with other somatic cells. But in mammals, the specific time and location of germ cell generation and specialization and their essential biological characteristics are still hot topics and difficulties in developmental biology.
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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2 米美玲;周玲;鄒挺;楊蓓;秦海燕;王晶磊;熊明悌;徐斯凡;萬秋華;;睪丸支持細(xì)胞和全反式視黃酸誘導(dǎo)骨髓干細(xì)胞向精原細(xì)胞分化的研究[J];江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2007年06期

3 華進(jìn)聯(lián),劉雨瀟,董武子,楊煒峰,竇忠英;原始生殖細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)育與EG細(xì)胞[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào);2005年03期

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本文編號(hào)：1347051