本文關(guān)鍵詞：弓形蟲(chóng)代謝分泌抗原和表面蛋白1抗原表位研究　出處：《中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院》2011年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：弓形蟲(chóng)是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲(chóng),具有廣泛的宿主群并在世界范圍內(nèi)流行,引起人獸共患寄生蟲(chóng)病。在畜牧業(yè)方面,懷孕動(dòng)物尤其是牛和羊會(huì)出現(xiàn)流產(chǎn)或死胎,豬會(huì)大批死亡,給畜牧業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。因此建立特異、快速、靈敏的弓形蟲(chóng)病診斷方法和研制有效預(yù)防弓形蟲(chóng)病的疫苗成為迫切需要解決的問(wèn)題。 由于弓形蟲(chóng)抗原成分較復(fù)雜,實(shí)驗(yàn)表明,單一抗原疫苗免疫效果或診斷試劑檢測(cè)效果均不理想,研制多表位疫苗和診斷試劑必然是一個(gè)新的發(fā)展策略。本研究在弓形蟲(chóng)代謝分泌抗原和多表位抗原免疫保護(hù)研究基礎(chǔ)之上,對(duì)主要抗原的線性B細(xì)胞表位進(jìn)行了鑒定,為制備弓形蟲(chóng)B細(xì)胞表位抗原奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下： 1)代謝分泌抗原(ESA)較其它可溶性抗原和包囊抗原能更好的誘導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng),是研制抗弓形蟲(chóng)疫苗的一種非常好的候選抗原。本研究評(píng)估了ESA與弗氏佐劑乳化疫苗對(duì)豬的免疫保護(hù)效果,通過(guò)對(duì)細(xì)胞免疫和體液免疫水平、血液中荷蟲(chóng)量、豬臨床癥狀、病理剖解及組織變化等一些重要參數(shù)的評(píng)估,表明ESA加弗氏佐劑乳化疫苗誘導(dǎo)豬產(chǎn)生的細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)能抵抗急性弓形蟲(chóng)感染。 2)本研究中,我們首次探討一個(gè)線性B細(xì)胞表位(來(lái)自表面蛋白1(SAG1)保守區(qū)域)和兩個(gè)T細(xì)胞表位(來(lái)自致密顆粒蛋白1(GRA1)和致密顆粒蛋白4(GRA4))通過(guò)GG間隔序列串聯(lián),然后連接到賴氨酸以多表位肽(MAP)形式免疫小鼠所引發(fā)的免疫反應(yīng)。結(jié)果,MAP結(jié)構(gòu)+弗氏佐劑不僅誘導(dǎo)BALB/c和昆明小鼠產(chǎn)生高水平特異性抗體,而且還誘導(dǎo)小鼠發(fā)生強(qiáng)烈的細(xì)胞免疫反應(yīng),用致死劑量的弓形蟲(chóng)GJS強(qiáng)毒株(1×103)攻擊免疫鼠,小鼠的存活時(shí)間比對(duì)照組的明顯延長(zhǎng)。數(shù)據(jù)證明多表位肽疫苗可作為一種弓形蟲(chóng)候選疫苗值得進(jìn)一步進(jìn)行研究。 3)本研究利用B細(xì)胞表位分析軟件預(yù)測(cè)和肽掃描技術(shù)兩種方法對(duì)弓形蟲(chóng)兩個(gè)主要抗原SAG1和GRA1的優(yōu)勢(shì)線性B細(xì)胞表位進(jìn)行篩選。對(duì)于SAG1鑒定到2個(gè)新的高度保守的線性B細(xì)胞抗原表位91PTLAYSPNRQICPAGTTSSCTSKAVTLSSL120和151PVTTQTFVVGCIKGDDAQSCMVTVTVQARA180;對(duì)于GRA1鑒定了3個(gè)新的高度保守的線性B細(xì)胞抗原表位134 YSEVGNVNMEEVIDTMKSMQ153、164NKGETVEEAIEDVAQAEGLN183和214LEKDKQQLKDDIGFLTGERE233),所鑒定到的表位與弓形蟲(chóng)感染豬血清反應(yīng)原性良好,有研發(fā)診斷試劑和表位疫苗的價(jià)值。 4)本研究以91PTLAYSPNRQICPAGTTSSCTSKAVTLSSL120和164NKGETVEEAIEDVAQAEGLN183兩條合成肽作為抗原建立了一種檢測(cè)豬弓形蟲(chóng)抗體的肽ELISA(Pep-ELISA)方法。敏感性和特異性分別為88.06%和97.87%。Pep-ELISA敏感性或許可通過(guò)增加其它抗原表位(源于同種蛋白或其他蛋白)得到進(jìn)一步提高,因此基于合成肽ELISA可能會(huì)成為弓形蟲(chóng)病診斷的重要工具之一。
[Abstract]:Toxoplasma gondii is a kind of special parasitic protozoa, which has a wide host group and is popular in the world, causing human zoonosis parasitosis. In the field of animal husbandry, pregnant animals, especially cattle and sheep, will have miscarriages or stillbirths, and pigs will die in large numbers, causing huge economic losses to the livestock industry. So to establish a diagnostic method for toxoplasmosis is specific, rapid and sensitive and develop effective vaccine against toxoplasmosis has become an urgent need to solve the problem.
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1346910