本文關(guān)鍵詞：弓形蟲代謝分泌抗原和表面蛋白1抗原表位研究　出處：《中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院》2011年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：弓形蟲是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲,具有廣泛的宿主群并在世界范圍內(nèi)流行,引起人獸共患寄生蟲病。在畜牧業(yè)方面,懷孕動物尤其是牛和羊會出現(xiàn)流產(chǎn)或死胎,豬會大批死亡,給畜牧業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失。因此建立特異、快速、靈敏的弓形蟲病診斷方法和研制有效預(yù)防弓形蟲病的疫苗成為迫切需要解決的問題。 由于弓形蟲抗原成分較復(fù)雜,實驗表明,單一抗原疫苗免疫效果或診斷試劑檢測效果均不理想,研制多表位疫苗和診斷試劑必然是一個新的發(fā)展策略。本研究在弓形蟲代謝分泌抗原和多表位抗原免疫保護研究基礎(chǔ)之上,對主要抗原的線性B細(xì)胞表位進行了鑒定,為制備弓形蟲B細(xì)胞表位抗原奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下： 1)代謝分泌抗原(ESA)較其它可溶性抗原和包囊抗原能更好的誘導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng),是研制抗弓形蟲疫苗的一種非常好的候選抗原。本研究評估了ESA與弗氏佐劑乳化疫苗對豬的免疫保護效果,通過對細(xì)胞免疫和體液免疫水平、血液中荷蟲量、豬臨床癥狀、病理剖解及組織變化等一些重要參數(shù)的評估,表明ESA加弗氏佐劑乳化疫苗誘導(dǎo)豬產(chǎn)生的細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)能抵抗急性弓形蟲感染。 2)本研究中,我們首次探討一個線性B細(xì)胞表位(來自表面蛋白1(SAG1)保守區(qū)域)和兩個T細(xì)胞表位(來自致密顆粒蛋白1(GRA1)和致密顆粒蛋白4(GRA4))通過GG間隔序列串聯(lián),然后連接到賴氨酸以多表位肽(MAP)形式免疫小鼠所引發(fā)的免疫反應(yīng)。結(jié)果,MAP結(jié)構(gòu)+弗氏佐劑不僅誘導(dǎo)BALB/c和昆明小鼠產(chǎn)生高水平特異性抗體,而且還誘導(dǎo)小鼠發(fā)生強烈的細(xì)胞免疫反應(yīng),用致死劑量的弓形蟲GJS強毒株(1×103)攻擊免疫鼠,小鼠的存活時間比對照組的明顯延長。數(shù)據(jù)證明多表位肽疫苗可作為一種弓形蟲候選疫苗值得進一步進行研究。 3)本研究利用B細(xì)胞表位分析軟件預(yù)測和肽掃描技術(shù)兩種方法對弓形蟲兩個主要抗原SAG1和GRA1的優(yōu)勢線性B細(xì)胞表位進行篩選。對于SAG1鑒定到2個新的高度保守的線性B細(xì)胞抗原表位91PTLAYSPNRQICPAGTTSSCTSKAVTLSSL120和151PVTTQTFVVGCIKGDDAQSCMVTVTVQARA180;對于GRA1鑒定了3個新的高度保守的線性B細(xì)胞抗原表位134 YSEVGNVNMEEVIDTMKSMQ153、164NKGETVEEAIEDVAQAEGLN183和214LEKDKQQLKDDIGFLTGERE233),所鑒定到的表位與弓形蟲感染豬血清反應(yīng)原性良好,有研發(fā)診斷試劑和表位疫苗的價值。 4)本研究以91PTLAYSPNRQICPAGTTSSCTSKAVTLSSL120和164NKGETVEEAIEDVAQAEGLN183兩條合成肽作為抗原建立了一種檢測豬弓形蟲抗體的肽ELISA(Pep-ELISA)方法。敏感性和特異性分別為88.06%和97.87%。Pep-ELISA敏感性或許可通過增加其它抗原表位(源于同種蛋白或其他蛋白)得到進一步提高,因此基于合成肽ELISA可能會成為弓形蟲病診斷的重要工具之一。
[Abstract]:Toxoplasma gondii is a kind of special parasitic protozoa, which has a wide host group and is popular in the world, causing human zoonosis parasitosis. In the field of animal husbandry, pregnant animals, especially cattle and sheep, will have miscarriages or stillbirths, and pigs will die in large numbers, causing huge economic losses to the livestock industry. So to establish a diagnostic method for toxoplasmosis is specific, rapid and sensitive and develop effective vaccine against toxoplasmosis has become an urgent need to solve the problem.
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R392

【參考文獻】

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本文編號：1346910