本文關(guān)鍵詞：抗人胱抑素C單克隆抗體制備及免疫檢測體系建立　出處：《衛(wèi)生研究》2017年04期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的獲得人胱抑素C(cystatin C,CysC)重組蛋白,制備親和力高、特異性強的單克隆抗體,建立檢測人血清中CysC的競爭ELISA檢測體系。方法根據(jù)美國國立生物技術(shù)信息中心(NCBI)CysC基因序列優(yōu)化合成CysC基因片段,并在大腸桿菌中表達得到CysC重組蛋白,免疫Balb/c小鼠后,通過雜交瘤細胞融合技術(shù)篩選獲得陽性雜交瘤細胞株,制備腹水型單抗并進行純化,通過間接ELISA法檢測抗體的親和力等性質(zhì),建立競爭ELISA檢測體系,并對52個血清樣本進行檢測。結(jié)果獲得了4株穩(wěn)定分泌CysC單克隆抗體的細胞株,將抗體Ab3作為檢測抗體并進行辣根過氧化物酶標(biāo)記,其親和力為4.26×10~6L/mol,檢測線性范圍為0.011~1.924μg/mL,檢測限為4.598 ng/mL,半數(shù)抑制率(IC_(50))為0.145μg/mL。建立的競爭ELISA血清檢測體系能準(zhǔn)確檢測52個血清樣本。結(jié)論獲得了親和力、特異性較高的單克隆抗體,建立了可靠的競爭ELISA血清檢測體系,為CysC快速免疫檢測試劑盒的研制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to obtain the recombinant protein of human cystatin C (cystatin C (CysC)) and prepare a monoclonal antibody with high affinity and specificity, and establish a competitive ELISA detection system for detecting CysC in human serum. Methods according to the National Center for Biotechnology Information (NCBI) CysC gene sequence optimization synthesis of CysC gene fragment in Escherichia coli, and expression of CysC recombinant protein, immunization of Balb/c mice after technology positive hybridoma cell lines were screened by hybridoma cell fusion, preparation of ascites were purified and detected by antibody indirect ELISA the affinity of nature, establish the competitive ELISA detection system and detection of 52 serum samples. Results 4 strains secreting monoclonal antibodies against CysC cell lines, Ab3 antibody as detection antibody and horseradish peroxidase labeled, its affinity is 4.26 * 10~6L/mol, the linear range of detection for 0.011~1.924 g/mL, the detection limit is 4.598 ng/mL, the half inhibition ratio (IC_ (50)) for 0.145 g/mL. The established competitive ELISA serum test system can accurately detect 52 serum samples. Conclusion the monoclonal antibodies with high affinity and specificity were obtained, and a reliable competitive ELISA serum detection system was established, which laid the foundation for the development of CysC rapid immunoassay kit.
【作者單位】： 南京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)國家重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.J1210026,81673439) 江蘇省自然科學(xué)基金(No.BK20161408)
【分類號】：R392-33
【正文快照】： 長期以來血漿尿素(Urea)、肌酐(Cr)和內(nèi)生肌酐清除率(Ccr)是反映腎小球濾過率(GFR)的常用檢測指標(biāo)[1],但是它們在血清中的濃度容易受外界因素影響,其檢測特異性和靈敏性也無法滿足即時快速檢測的要求。因此需要更靈敏準(zhǔn)確的GFR檢測指標(biāo)。胱抑素C(cystatin C,Cys C)即半胱氨酸

【參考文獻】

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本文編號：1345976