本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-182與淋巴細(xì)胞腫瘤糖皮質(zhì)激素耐藥的相關(guān)性研究　出處：《復(fù)旦大學(xué)》2011年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 淋巴細(xì)胞腫瘤 糖皮質(zhì)激素耐藥 miRNA-182 FoxO3a 細(xì)胞凋亡

【摘要】：MicroRNA-182與淋巴細(xì)胞腫瘤糖皮質(zhì)激素耐藥的相關(guān)性研究 目的 糖皮質(zhì)激素(GCs)是血液腫瘤化療方案中的一線用藥,而糖皮質(zhì)激素耐藥則是化療失敗的主要原因,導(dǎo)致疾病的難治和復(fù)發(fā)。目前關(guān)于糖皮質(zhì)激素耐藥機(jī)制的研究則是臨床解決攻破的難題之一。FoxO3a是FOXO家族的關(guān)鍵成員之一,介導(dǎo)著細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑特別在調(diào)控細(xì)胞凋亡上,有著特殊的角色作用,且在GCs行使作用中,是不可或缺的參與者。但是FoxO3a的調(diào)控機(jī)制非常復(fù)雜,很多機(jī)制尚不清楚。MicroRNAs(miRNAs)是一類(lèi)內(nèi)源性表達(dá)的小分子非編碼RNA,能夠在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá),已成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。本項(xiàng)研究,我們擬探討在淋巴細(xì)胞腫瘤中(?)miRNA-182對(duì)FoxO3a的調(diào)控以及它們與淋巴細(xì)胞腫瘤糖皮質(zhì)激素耐藥的相關(guān)性。 方法 a)用qRT-PCR檢測(cè)不同糖皮質(zhì)激素敏感性的淋巴細(xì)胞腫瘤細(xì)胞株的miRNA-182的表達(dá)水平。 b)用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)行凋亡檢測(cè),篩選和鑒定糖皮質(zhì)激素敏感淋巴細(xì)胞腫瘤細(xì)胞株和糖皮質(zhì)激素耐藥的淋巴細(xì)胞腫瘤細(xì)胞株,以及用CCK-8法進(jìn)行不同淋巴細(xì)胞腫瘤細(xì)胞株的糖皮質(zhì)激素耐藥程度比較。 c)用Western blot的方法分別檢測(cè)糖皮質(zhì)激素敏感淋巴細(xì)胞腫瘤細(xì)胞株以及糖皮質(zhì)激素耐藥淋巴細(xì)胞腫瘤細(xì)胞株在接受糖皮質(zhì)激素預(yù)孵育前后總FoxO3a和磷酸化FoxO3a的變化。 d)通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)表達(dá)綠色熒光素的淋巴細(xì)胞腫瘤細(xì)胞評(píng)估m(xù)iRNA的轉(zhuǎn)染效率。選擇較高轉(zhuǎn)染效率的細(xì)胞株,行(?)niRNA-182過(guò)表達(dá),并用RT-PCR檢測(cè)過(guò)表達(dá)miRNA-182后,細(xì)胞株miRNA-182的表達(dá)量的變化,并用Western blot的方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后,糖皮質(zhì)激素預(yù)孵育淋巴細(xì)胞腫瘤細(xì)胞株前后總FoxO3a和磷酸化FoxO3a的變化。 e)在糖皮質(zhì)激素敏感細(xì)胞株CCRF-CEM中,過(guò)表達(dá)miRNA-182 24h后,加入等量糖皮質(zhì)激素孵育48h后收集細(xì)胞,用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)行凋亡檢測(cè)；同時(shí)Western blot檢測(cè)Bim蛋白水平。 f)在糖皮質(zhì)激素耐藥細(xì)胞株HUT-78中,沉默miRNA-182 24h后,加入等量糖皮質(zhì)激素孵育48h后收集細(xì)胞,用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)行凋亡檢測(cè)；同時(shí)Western blot檢測(cè)Bim蛋白水平。 結(jié)果 1. miRNA-182在不同淋巴細(xì)胞腫瘤細(xì)胞株內(nèi)表達(dá)各異,耐藥細(xì)胞株Jurkat相對(duì)表達(dá)量最高,Molt-4表達(dá)量?jī)H次之,而敏感細(xì)胞株SUP-B15以及野生型脾細(xì)胞表達(dá)量相對(duì)極低。 2.淋巴細(xì)胞腫瘤細(xì)胞株中,糖皮質(zhì)激素耐藥細(xì)胞株Jurkat和Molt-4,二者在濃度高達(dá)10μM的地塞米松的孵育48h后,凋亡率少于5%；在糖皮質(zhì)激素敏感的脾細(xì)胞及SUP-B15細(xì)胞株中,分別用100nM地塞米松孵育8h和36h,凋亡容易發(fā)生,凋亡率可達(dá)50%以上；另外,不同地塞米松濃度下行凋亡率比較,Jurkat明顯比Molt-4耐藥；而且比較不同地塞米松濃度處理下CCRF-CEM與HUT-78的細(xì)胞存活率,CCRF-CEM明顯比HUT-78敏感,耐藥程度明顯低于HUT-78。 3.選擇用轉(zhuǎn)染效率較高的淋巴細(xì)胞腫瘤細(xì)胞株CCRF-CEM,過(guò)表達(dá)miRNA-182,總FoxO3a隨著miRNA-182轉(zhuǎn)染量的增加而抑制越明顯,50nM抑制效果最佳,而磷酸化FoxO3a表達(dá)水平不受影響。 4.對(duì)地塞米松敏感的淋巴細(xì)胞腫瘤細(xì)胞株受到地塞米松作用后,總FoxO3a升高,磷酸化FoxO3a減少,而對(duì)地塞米松耐藥的血液腫瘤細(xì)胞株在接受地塞米松處理前后變化不大。 5.過(guò)表達(dá)miRNA-182,可增強(qiáng)淋巴細(xì)胞腫瘤細(xì)胞株抵抗糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的凋亡；在CCRF-CEM細(xì)胞株中,過(guò)表達(dá)miRNA-182, 1μM濃度地塞米松作用下,與空白對(duì)照相比,凋亡率被下調(diào),Bim表達(dá)量較低。 6.沉默miRNA-182,可增加淋巴細(xì)胞腫瘤細(xì)胞株對(duì)糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的凋亡；在HUT-78細(xì)胞株中,沉默miRNA-182, 10μM濃度地塞米松作用下,凋亡率較空白對(duì)照上調(diào),Bim表達(dá)量較高。 結(jié)論 1.在糖皮質(zhì)激素敏感的淋巴細(xì)胞腫瘤細(xì)胞株中,其磷酸化FoxO3a水平顯著降低,而總FoxO3a水平升高,但對(duì)于糖皮質(zhì)激素耐藥的淋巴細(xì)胞腫瘤細(xì)胞株,總FoxO3a和磷酸化FoxO3a的水平變化均不大,推斷改變FoxO3a的基因表達(dá)水平或者磷酸化狀態(tài)的改變,可能一定程度上影響并反映淋巴細(xì)胞腫瘤對(duì)糖皮質(zhì)激素的敏感程度。 2. miRNA-182能夠有效下調(diào)淋巴細(xì)胞腫瘤的FoxO3a的蛋白表達(dá)水平,并呈濃度依賴(lài)關(guān)系,而非改變磷酸化FoxO3a的蛋白表達(dá)水平。 3.外源性干預(yù)miRNA-182表達(dá)水平,影響著淋巴細(xì)胞腫瘤對(duì)糖皮質(zhì)激素的敏感性。 4.比較多種淋巴細(xì)胞腫瘤細(xì)胞株中(?)niRNA-182表達(dá)豐度,糖皮質(zhì)激素敏感細(xì)胞株表達(dá)量相對(duì)較低,糖皮質(zhì)激素耐藥細(xì)胞株表達(dá)量相對(duì)較高,推斷淋巴細(xì)胞腫瘤糖皮質(zhì)激素耐藥的發(fā)生,可能與細(xì)胞內(nèi)異常表達(dá)的miRNA-182相關(guān)。
[Abstract]:Study on the correlation between MicroRNA-182 and glucocorticoid resistance in lymphocyte tumors
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類(lèi)號(hào)】：R392.4

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 尹玉;李明;李昊;江燕;曹立宇;張洪福;徐曉春;;6種microRNAs在前列腺癌組織中的表達(dá)[J];中華男科學(xué)雜志;2010年07期

，

本文編號(hào)：1345119