本文關(guān)鍵詞：副溶血弧菌TDH的原核表達(dá)及單克隆抗體的制備　出處：《食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)》2017年03期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 副溶血性弧菌 耐熱直接溶血毒素 原核表達(dá) 單克隆抗體 制備

【摘要】：為實(shí)現(xiàn)副溶血性弧菌tdh基因的原核表達(dá),采用TCBS選擇培養(yǎng)基從貝類中篩選副溶血性弧菌疑似菌株;根據(jù)Gen Bank上已有的tdh基因序列,設(shè)計(jì)并人工合成引物,通過PCR技術(shù)鑒定副溶血性弧菌并擴(kuò)增tdh基因;酶切后定向插入到p ET-28a表達(dá)載體中,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒p ET-28a-tdh,轉(zhuǎn)入E.coli Rosetta中,在IPTG誘導(dǎo)下進(jìn)行TDH蛋白表達(dá)。為制備耐熱直接溶血毒素TDH單克隆抗體,用純化的蛋白作為免疫原免疫BALB/c小鼠,成功用原核載體表達(dá)的TDH蛋白為免疫原,制得一株能穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞,命名為T9N10。獲取腹水并經(jīng)Ni-NTA Resin親和柱純化,其穩(wěn)定分泌的單克隆抗體經(jīng)鑒定為Ig G1,相對(duì)分子質(zhì)量約為146 000,并表現(xiàn)出較強(qiáng)的特異性。本研究為開發(fā)副溶血弧菌免疫學(xué)快速檢測(cè)和深入的研究奠定良好的物質(zhì)基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to realize the prokaryotic expression of TDH gene of Vibrio parahaemolyticus, using TCBS screening of Vibrio parahaemolyticus strains suspected from shellfish culture; according to the TDH gene sequence of Gen Bank on the artificial primers were designed and synthesized by PCR technology, and identification of Vibrio parahaemolyticus and TDH gene amplification; enzyme digestion after inserted into P ET-28a expression vector, the recombinant plasmid P ET-28a-tdh into E.coli, Rosetta, TDH protein expression was induced by IPTG. In order to prepare monoclonal antibodies against heat direct hemolytic toxin TDH, immunized with purified protein, BALB/c mice were successfully immunized with TDH protein expressed in prokaryotic vector. A hybridoma cell secreting monoclonal antibody was named as T9N10. The ascites was purified by Ni-NTA Resin affinity column, and its stable secreted monoclonal antibody was identified as Ig G1, with a relative molecular mass of about 146000, and showed strong specificity. This study provides a good material basis for the development of rapid immunology detection and in-depth study of Vibrio parahaemolyticus.
【作者單位】： 浙江醫(yī)藥高等�？茖W(xué)校生物與制藥學(xué)院;天津市河北區(qū)疾病防疫控制中心;浙江大學(xué)明州醫(yī)院;
【基金】：浙江醫(yī)藥高等�？茖W(xué)校教學(xué)科研項(xiàng)目(2012024)
【分類號(hào)】：R378.3
【正文快照】： Preparation of Monoclonal Antibody against TDH近年來,由感染引起的食物中毒已經(jīng)成為了嚴(yán)重的食源性公共衛(wèi)生問題。副溶血性弧菌(VibrioParahaemolyticus,VP)是一種嗜鹽性細(xì)菌,主要存在于近海岸的魚類、貝類等海產(chǎn)品中,人食用污染有該致病菌的海產(chǎn)品后可引起胃腸炎,嚴(yán)重時(shí)

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