本文關(guān)鍵詞：重組結(jié)核分枝桿菌TB10.4的表達(dá)及免疫反應(yīng)性分析　出處：《中國(guó)病原生物學(xué)雜志》2017年07期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌TB10.4的原核重組表達(dá)體系并表達(dá)TB10.4,分析其反應(yīng)原性。方法 GenBank報(bào)道的結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv TB10.4基因序列設(shè)計(jì)并合成引物,從H37Rv基因組DNA為模板PCR擴(kuò)增TB10.4基因片段,克隆至pMD-18T載體后轉(zhuǎn)化大腸埃希菌JM109,篩選和鑒定陽(yáng)性克隆,并進(jìn)行測(cè)序分析。將TB 10.4基因插入原核表達(dá)載體pET-28a后轉(zhuǎn)化大腸埃希菌E.coli DH5ɑ,PCR和雙酶切鑒定陽(yáng)性的重組子轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)TB 10.4蛋白。冰浴超聲裂解重組菌,His-bindTM柱層析純化TB10.4蛋白,Western blot分析其反應(yīng)原性,ELISA評(píng)價(jià)其診斷結(jié)核病的價(jià)值。結(jié)果 PCR擴(kuò)增和克隆獲得TB10.4基因片段,大小約300bp,與GenBank中報(bào)道的序列一致。將TB10.4基因片段插入原核表達(dá)載體,構(gòu)建TB10.4蛋白重組表達(dá)體系,金屬螯合層析獲得分子質(zhì)量單位約為10.4ku的TB10.4。Western blot證實(shí)TB10.4蛋白可被結(jié)核患者血清特異識(shí)別。以重組TB10.4為抗原采用ELISA診斷結(jié)核病的靈敏度為88.5%,特異度為97.3%,陽(yáng)性預(yù)測(cè)值93.8%,陰性預(yù)測(cè)值94.8%,診斷效率94.5%。結(jié)論成功構(gòu)建了TB10.4蛋白的重組表達(dá)體系,表達(dá)的TB10.4蛋白具有反應(yīng)原性,可用于結(jié)核病的免疫診斷。
[Abstract]:Objective to construct a Recombinant Prokaryotic Recombinant Expression System of Mycobacterium tuberculosis TB10.4 and to express TB10.4, and to analyze its reactivity. The method reported by GenBank standard strain of Mycobacterium tuberculosis H37Rv TB10.4 gene sequences were designed and synthesized primers, the TB10.4 gene fragment was amplified by PCR from H37Rv genome DNA as template, transformed into Escherichia coli JM109 was cloned into the pMD-18T vector, screening and identification of positive clones were sequenced and analyzed. The TB 10.4 gene was inserted into prokaryotic expression vector pET-28a and transformed into Escherichia coli E.coli DH5 alpha, PCR and double enzyme digestion of the recombinant plasmid was transformed into Escherichia coli BL21, IPTG induced the expression of TB 10.4 protein. The recombinant bacteria were cleavage by ice bath, TB10.4 protein was purified by His-bindTM column chromatography, Western blot was used to analyze its reactive progenicity, and ELISA was used to evaluate the diagnostic value of TB. Results the TB10.4 gene fragment was obtained by PCR amplification and cloning, and the size was about 300bp, which was consistent with the sequence reported in GenBank. The TB10.4 gene fragment was inserted into the prokaryotic expression vector, and the recombinant expression system of TB10.4 protein was constructed. The metal chelation chromatography was used to obtain the TB10.4 of the molecular mass of about 10.4ku. Western blot confirmed that the TB10.4 protein could be identified by the serum of patients with tuberculosis. Using recombinant TB10.4 as antigen, the sensitivity of TB diagnosis by ELISA is 88.5%, the specificity is 97.3%, the positive predictive value is 93.8%, the negative predictive value is 94.8%, and the diagnostic efficiency is 94.5%. Conclusion the recombinant expression system of TB10.4 protein has been successfully constructed, and the expressed TB10.4 protein has reactivity and can be used in the diagnosis of tuberculosis.
【作者單位】： 湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院;湖南省結(jié)核病防治研究所檢驗(yàn)科;
【分類號(hào)】：R378.911
【正文快照】： 結(jié)核病(Tubeculosis,TB)是由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)所致的慢性傳染病。2015年,全世界約有1 040萬(wàn)例新發(fā)結(jié)核病例,約 有180萬(wàn)例結(jié)核病患者死亡[1]。廣泛耐藥性肺結(jié)核具有使Mtb感染惡化的趨勢(shì)[2],結(jié)核病的早期診斷和治療是有效控制這種趨勢(shì)蔓延的關(guān)鍵。

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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