本文關鍵詞：重組結核分枝桿菌TB10.4的表達及免疫反應性分析　出處：《中國病原生物學雜志》2017年07期 　論文類型：期刊論文

  更多相關文章： 結核分枝桿菌 TB. 表達 結核病

【摘要】：目的構建結核分枝桿菌TB10.4的原核重組表達體系并表達TB10.4,分析其反應原性。方法 GenBank報道的結核分枝桿菌標準株H37Rv TB10.4基因序列設計并合成引物,從H37Rv基因組DNA為模板PCR擴增TB10.4基因片段,克隆至pMD-18T載體后轉化大腸埃希菌JM109,篩選和鑒定陽性克隆,并進行測序分析。將TB 10.4基因插入原核表達載體pET-28a后轉化大腸埃希菌E.coli DH5ɑ,PCR和雙酶切鑒定陽性的重組子轉化大腸埃希菌BL21,IPTG誘導表達TB 10.4蛋白。冰浴超聲裂解重組菌,His-bindTM柱層析純化TB10.4蛋白,Western blot分析其反應原性,ELISA評價其診斷結核病的價值。結果 PCR擴增和克隆獲得TB10.4基因片段,大小約300bp,與GenBank中報道的序列一致。將TB10.4基因片段插入原核表達載體,構建TB10.4蛋白重組表達體系,金屬螯合層析獲得分子質量單位約為10.4ku的TB10.4。Western blot證實TB10.4蛋白可被結核患者血清特異識別。以重組TB10.4為抗原采用ELISA診斷結核病的靈敏度為88.5%,特異度為97.3%,陽性預測值93.8%,陰性預測值94.8%,診斷效率94.5%。結論成功構建了TB10.4蛋白的重組表達體系,表達的TB10.4蛋白具有反應原性,可用于結核病的免疫診斷。
[Abstract]:Objective to construct a Recombinant Prokaryotic Recombinant Expression System of Mycobacterium tuberculosis TB10.4 and to express TB10.4, and to analyze its reactivity. The method reported by GenBank standard strain of Mycobacterium tuberculosis H37Rv TB10.4 gene sequences were designed and synthesized primers, the TB10.4 gene fragment was amplified by PCR from H37Rv genome DNA as template, transformed into Escherichia coli JM109 was cloned into the pMD-18T vector, screening and identification of positive clones were sequenced and analyzed. The TB 10.4 gene was inserted into prokaryotic expression vector pET-28a and transformed into Escherichia coli E.coli DH5 alpha, PCR and double enzyme digestion of the recombinant plasmid was transformed into Escherichia coli BL21, IPTG induced the expression of TB 10.4 protein. The recombinant bacteria were cleavage by ice bath, TB10.4 protein was purified by His-bindTM column chromatography, Western blot was used to analyze its reactive progenicity, and ELISA was used to evaluate the diagnostic value of TB. Results the TB10.4 gene fragment was obtained by PCR amplification and cloning, and the size was about 300bp, which was consistent with the sequence reported in GenBank. The TB10.4 gene fragment was inserted into the prokaryotic expression vector, and the recombinant expression system of TB10.4 protein was constructed. The metal chelation chromatography was used to obtain the TB10.4 of the molecular mass of about 10.4ku. Western blot confirmed that the TB10.4 protein could be identified by the serum of patients with tuberculosis. Using recombinant TB10.4 as antigen, the sensitivity of TB diagnosis by ELISA is 88.5%, the specificity is 97.3%, the positive predictive value is 93.8%, the negative predictive value is 94.8%, and the diagnostic efficiency is 94.5%. Conclusion the recombinant expression system of TB10.4 protein has been successfully constructed, and the expressed TB10.4 protein has reactivity and can be used in the diagnosis of tuberculosis.
【作者單位】： 湖南師范大學醫(yī)學院;湖南省結核病防治研究所檢驗科;
【分類號】：R378.911
【正文快照】： 結核病(Tubeculosis,TB)是由結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)所致的慢性傳染病。2015年,全世界約有1 040萬例新發(fā)結核病例,約 有180萬例結核病患者死亡[1]。廣泛耐藥性肺結核具有使Mtb感染惡化的趨勢[2],結核病的早期診斷和治療是有效控制這種趨勢蔓延的關鍵。

【參考文獻】

相關期刊論文 前4條

1 陳連勇;楊星;馬利;楊慧娟;陳金甌;茹浩浩;閆雙群;許琳;;云南省部分地區(qū)結核分枝桿菌北京基因型流行情況分析[J];中國病原生物學雜志;2015年09期

2 郭建;范齊文;范小勇;馬輝;錢雪琴;胡香南;吳文娟;;結核分枝桿菌rdESAT-6抗原在恥垢分枝桿菌中的制備及其血清學診斷研究[J];檢驗醫(yī)學;2014年06期

3 朱中元;劉元;王海波;肖勁逐;邱一帆;顏磊;陳德;劉愛國;楊欣;;TB16.3重組蛋白在結核感染中的診斷價值研究[J];中國人獸共患病學報;2013年08期

4 劉志輝,羅一魯;結核病實驗診斷現(xiàn)狀及展望[J];中國防癆雜志;2003年01期

【共引文獻】

相關期刊論文 前10條

1 任琪琪;謝琳;袁仕善;郭婧瑋;蔣華科;譚云洪;;重組結核分枝桿菌TB10.4的表達及免疫反應性分析[J];中國病原生物學雜志;2017年07期

2 劉漢群;;蛋白芯片技術聯(lián)合結核菌素試驗對痰陰肺結核病快速診斷的價值研究[J];黑龍江醫(yī)學;2017年02期

3 袁薇;鄭雯琳;何昱穎;魏川川;陳依江;逄宇;;我國西部貴州地區(qū)結核分枝桿菌分子流行病學初步研究[J];中華疾病控制雜志;2017年01期

4 孫睿峰;項智灝;陳福增;茹歡委;麥俊濤;袁俐;劉軍;;2種結核分枝桿菌抗原對潛伏感染人群鑒別診斷潛力分析[J];檢驗醫(yī)學;2016年08期

5 周覓;李青峰;曹玲;趙麗;左浩江;裴曉方;;芯片法和培養(yǎng)法對結核分枝桿菌耐藥檢測的對比研究[J];四川師范大學學報(自然科學版);2016年04期

6 古努爾·吐爾遜;努爾拜合提;沙依蘭·卡依扎;王俊偉;呼西旦·阿巴拜克力;;牛結核分枝桿菌株快速培養(yǎng)方法的對比[J];中國動物檢疫;2015年12期

7 肖學文;;結核分枝桿菌蛋白芯片法檢測對結核病輔助診斷的應用[J];中國熱帶醫(yī)學;2015年10期

8 明月;張文慧;張林波;;結核桿菌診斷抗原的研究進展[J];畜牧與獸醫(yī);2015年10期

9 黃江;李小峰;楊淵;;前路鋼板置入內固定與自體髂骨植骨融合修復胸椎結核的骨愈合[J];中國組織工程研究;2014年40期

10 張立群;劉一典;朱友生;唐神結;;我國結核病臨床診治的回顧與展望[J];中國防癆雜志;2014年09期

【二級參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 李瑞山;雷英;吳芳;張輝;張春軍;章樂;曹旭東;吳江東;朱彬;張玉清;鄔博;何麗;王釗;張萬江;;結核分枝桿菌國際標準強毒株H37Rv菌株Pup-蛋白酶體系統(tǒng)Pup基因、Mpa基因、Dop基因和PafA基因缺失突變株的構建[J];中國病原生物學雜志;2015年01期

2 董毅;吳利先;;大理地區(qū)結核分枝桿菌MIRU-VNTR位點的多態(tài)性分析[J];中國病原生物學雜志;2014年04期

3 郭建;范齊文;盧水華;鄧桂林;吳文娟;;肺外結核感染的快速分子檢測和菌株分型方法的應用[J];中華檢驗醫(yī)學雜志;2013年07期

4 黃藝;張樹青;米利古;李永祥;梁海燕;李楓;李華;李雯婧;袁俐;;新疆北疆地區(qū)北京/W系結核分枝桿菌臨床分離株的流行特征及耐藥相關性研究[J];中國病原生物學雜志;2013年03期

5 楊筠(jun);董海燕;李定越;劉志廣;陳建;楊筠(yun);龍波;萬康林;;四川省106株結核分枝桿菌spoligotyping基因分型研究[J];醫(yī)學研究雜志;2012年05期

6 彭哲;朱朝敏;幸琳琳;劉芮汐;;結核分枝桿菌北京基因型菌株與重慶地區(qū)結核患兒耐藥表型的相關分析[J];第三軍醫(yī)大學學報;2010年23期

7 楊洪毅;李輝;馬士文;馬曉光;高謙;;MIRU-VNTR技術對源于河南的北京基因型結核分枝桿菌分型研究[J];中國衛(wèi)生檢驗雜志;2010年06期

8 吳長東;米利古;龔天美;楊海洲;王遠志;李永祥;張向暉;吳萬貴;邢建新;袁俐;;RD105缺失基因檢測法用于結核分枝桿菌新疆“北京家族”臨床分離株的鑒定[J];中國病原生物學雜志;2010年03期

9 王勝芬;趙雁林;黃海榮;李強;周楊;歐喜超;付育紅;;結核分枝桿菌北京基因型菌株與耐藥表型的關系[J];中國醫(yī)學科學院學報;2009年04期

10 郭建;范小勇;馬輝;盧水華;熊延青;朱友林;李忠明;郭盛淇;;結核分枝桿菌ESAT-6重組二聚體的表達、純化及其在血清學診斷中的初步應用[J];中國生物制品學雜志;2009年02期

【相似文獻】

相關期刊論文 前1條

1 王瑞博;井申榮;;結核分枝桿菌分泌蛋白TB10.4的功能和應用[J];生命的化學;2011年04期

，

本文編號：1343388