本文關(guān)鍵詞：Pyk2在小鼠卵子受精及早期胚胎發(fā)育過程中的定位研究　出處：《山東師范大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：Pyk2是一種非受體酪氨酸激酶，屬于粘著斑家族中的成員，與FAK有密切關(guān)系，是一種進(jìn)化上非常保守的蛋白質(zhì)。Pyk2在不同的細(xì)胞中與不同的分子相互作用，從而發(fā)揮不同的作用。目前，對(duì)于Pyk2的研究主要集中在體細(xì)胞中，并且在體細(xì)胞中的功能具有多樣性；它可以感受包括細(xì)胞外基質(zhì)在內(nèi)的多種物理和化學(xué)的細(xì)胞外信號(hào)而激活，參與胞內(nèi)信號(hào)傳遞，從而在細(xì)胞粘附、遷移、生存、增殖、凋亡等過程中發(fā)揮重要作用。但Pyk2在生殖細(xì)胞中的功能研究很少。本實(shí)驗(yàn)室曾研究了Pyk2在大鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂成熟過程中的定位及功能，發(fā)現(xiàn)Pyk2可能通過調(diào)節(jié)微絲的聚合與組裝在大鼠卵母細(xì)胞極性的建立、第一極體排出過程中發(fā)揮重要作用。另有研究發(fā)現(xiàn)，Pyk2參與癌細(xì)胞的增殖和遷移，成為目前癌癥治療的靶點(diǎn)。哺乳動(dòng)物早期胚胎發(fā)育過程的細(xì)胞分裂類似癌細(xì)胞的增殖，因此，Pyk2可能也在這一過程中發(fā)揮重要作用，但是，目前未見相關(guān)研究和報(bào)道。本研究應(yīng)用蛋白印跡、共聚焦顯微術(shù)、抑制劑干擾等方法對(duì)Pyk2在成熟卵子中的表達(dá)和其在小鼠卵子受精及早期胚胎發(fā)育過程中的定位進(jìn)行了研究，為進(jìn)一步了解其功能奠定基礎(chǔ)。 研究發(fā)現(xiàn)在小鼠卵母細(xì)胞受精過程中，無論是體內(nèi)受精還是體外受精取出的受精卵，Pyk2除了均勻分布在細(xì)胞質(zhì)中外，還特異性地聚集在精子頭部及形成的雌雄原核中；在小鼠體內(nèi)取出和體外培養(yǎng)的早期胚胎中，Pyk2均勻地分布在細(xì)胞質(zhì)中，此外還特異性地聚集在細(xì)胞核除核仁之外的區(qū)域，包括分散在核中的染色質(zhì)上，也可見Pyk2的分布。在分裂期的卵裂球中，染色質(zhì)凝集為染色體，此時(shí)Pyk2也呈點(diǎn)狀分布在染色體上。從體內(nèi)取出的較晚期的囊胚中，Pyk2在細(xì)胞核中消失，主要分布在細(xì)胞與細(xì)胞的連接處，只有少數(shù)細(xì)胞中，還可見細(xì)胞質(zhì)中有Pyk2的表達(dá)。而較多的Pyk2聚集在囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞外的空隙中。 另外，我們進(jìn)一步研究了第402位酪氨酸磷酸化的Pyk2（P-Pyk2）在小鼠早期胚胎發(fā)育過程中的定位分布情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在體內(nèi)的早期胚胎發(fā)育過程中幾乎檢測(cè)不到P-Pyk2的分布，只有在早期胚胎3-細(xì)胞、4-細(xì)胞和桑葚胚中有少量的Pyk2被活化，并呈星點(diǎn)狀分布在細(xì)胞質(zhì)中。而在體外培養(yǎng)的早期胚胎中只有在2-細(xì)胞胚胎中檢測(cè)到較明顯的P-Pyk2分布，而且只分布在細(xì)胞與細(xì)胞的接觸處；4-細(xì)胞、桑葚胚和早期囊胚中，可見少量P-Pyk2呈星點(diǎn)狀分布在胞質(zhì)中。 為了研究Pyk2可能具有的功能，用不同濃度（2.5μmol/L、1.25μmol/L、1μmol/L、0.8μmol/L、0.625μmol/L）的酪氨酸激酶抑制劑Tyrphostin A9處理體外培養(yǎng)的受精卵，發(fā)現(xiàn)Tyrphostin A9能夠抑制受精卵的卵裂，但是這種抑制并不是呈濃度依賴性，，而是呈現(xiàn)全或無的特征，既當(dāng)抑制劑濃度大于1μmol/L時(shí)，卵裂即被抑制，而當(dāng)抑制劑濃度小于0.8μmol/L時(shí)，雖然其卵裂率與對(duì)照組之間呈顯著性差異，但大部分受精卵的卵裂則不受影響。另外，通過檢測(cè)抑制的受精卵在Pyk2的分布變化，發(fā)現(xiàn)Pyk2表達(dá)明顯上升。令人吃驚的是，Tyrphostin A9不僅沒有抑制Pyk2的磷酸化，反而顯著增加了第402位酪氨酸的磷酸化，通過檢測(cè)對(duì)抑制劑處理后仍可以正常卵裂的2-細(xì)胞胚胎中P-Pyk2的定位變化發(fā)現(xiàn)，其表達(dá)量顯著增加，不僅在整個(gè)胞質(zhì)都有分布，而且在細(xì)胞核中還有特異性聚集。這些結(jié)果說明受精卵在有抑制劑Tyrphostin A9的環(huán)境下，通過激活Pyk2來維持自身的早期胚胎發(fā)育的。
[Abstract]:Pyk2 is a non receptor tyrosine kinase, a member of the plaque family, closely related to FAK, and is an evolutionary very conservative protein. Pyk2 interacts with different molecules in different cells and plays a different role. At present, the research of Pyk2 is mainly concentrated in the body cells, and have diversity in somatic cell function; it can be a variety of physical and chemical extracellular signals including extracellular matrix, feelings and activation of intracellular signaling, participate in, and play an important role in the process of cell adhesion, migration, survival, proliferation apoptosis and. However, the function of Pyk2 in germ cells is rarely studied. Our laboratory has studied the location and function of Pyk2 in meiotic maturation of rat oocytes. It is found that Pyk2 may play an important role in the establishment of polarity and the first polar body discharge in rat oocytes by regulating the polymerization and assembly of microfilaments. Other studies have found that Pyk2 participates in the proliferation and migration of cancer cells, and has become the target of cancer treatment. Cell division in early mammalian embryo development is similar to the proliferation of cancer cells. Therefore, Pyk2 may play an important role in this process, but there is no relevant research and report. In this study, Western blotting, confocal microscopy and inhibitor interference were applied to study the expression of Pyk2 in mature ovum and its localization in mouse oocyte fertilization and early embryo development, so as to lay a foundation for further understanding of its function.
【學(xué)位授予單位】：山東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R321

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1342269