本文關鍵詞：弓形蟲ROP18蛋白激酶在酵母中的表達純化及激酶活性鑒定　出處：《熱帶醫(yī)學雜志》2016年06期 　論文類型：期刊論文

  更多相關文章： 弓形蟲 ROP 酵母表達 純化 激酶活性

【摘要】：目的建立利用酵母表達系統(tǒng)獲得有較高激酶活性的弓形蟲棒狀體蛋白(ROP18)激酶的表達純化方法。方法利用PCR技術從弓形蟲基因組DNA擴增弓形蟲ROP18基因,通過Gateway系統(tǒng)將ROP18基因克隆到酵母表達載體pEGH-A中。將表達載體pEGH-A-ROP18轉化至Y258酵母菌株中并誘導表達,表達產物純化后通過SDS-PAGE進行純度鑒定;最后通過激酶活性實驗對純化的重組蛋白進行激酶活性鑒定。結果構建了弓形蟲ROP18激酶重組表達質粒pEGH-A-ROP18和pEGH-A-ROP18-KD,并成功在酵母表達系統(tǒng)表達弓形蟲ROP18重組蛋白,其分子量約為8.2×10~4 Mr,SDS-PAGE蛋白電泳顯示為單一條帶,并具有較高的激酶活性。結論利用酵母細胞表達系統(tǒng)成功表達并純化了有激酶活性的弓形蟲ROP18蛋白激酶。
【作者單位】： 中山大學中山醫(yī)學院;中山大學中山醫(yī)學院熱帶病防治研究教育部重點實驗室;
【基金】：國家自然科學基金(81328014) 廣東省自然科學基金(2015A030313105) 廣東省科技計劃項目(2014A020214002)
【分類號】：R382.5
【正文快照】： 弓形蟲屬于頂端復合物亞門,是一種世界性分布的重要條件性致病病原體,幾乎可以感染所有有核細胞[1]。全世界估計三分之一的人群被感染弓形蟲[2],中國人群的感染率約為5%~10%[3]。弓形蟲感染宿主時,其棒狀體可向宿主細胞分泌棒狀蛋白(rhoptries protein,ROP),其中ROP18是弓形蟲，

本文編號：1322972