本文關(guān)鍵詞：FK506結(jié)合蛋白25及其突變體與CLIC1蛋白在真核細(xì)胞內(nèi)共定位的研究　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報》2016年10期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： FKBP 轉(zhuǎn)染 基因表達(dá) 共定位

【摘要】：目的研究FK506結(jié)合蛋白25(FKBP25)野生型及其突變體在真核細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)、定位及與胞內(nèi)氯離子通道蛋白1(CLIC1)的共定位情況。方法以pc DNA3.1-FKBP25-FLAG為模板,分別構(gòu)建以p CDGFP為載體的FKBP25野生型及其缺失突變體FKBP25(1~42 aa)、FKBP25(1~110aa)、FKBP25(43~224 aa)、FKBP25(43~110 aa)、FKBP25(111~224 aa)的真核表達(dá)質(zhì)粒,并分別轉(zhuǎn)染至HEK 293T細(xì)胞中,Western blot法檢測重組蛋白表達(dá)情況;將上述質(zhì)粒分別與帶FLAG標(biāo)簽的CLIC1質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至COS7細(xì)胞,激光共聚焦掃描顯微鏡下觀察、分析熒光共定位情況。結(jié)果成功構(gòu)建了p CDGFP-FKBP25基因的一系列真核表達(dá)質(zhì)粒;Western blot顯示:p CDGFP-FKBP25及其突變體p CDGFPFKBP25(1~42 aa)、p CDGFP-FKBP25(1~110 aa)、p CDGFPFKBP25(43~110 aa)、p CDGFP-FKBP25(43~224 aa)、p CDGFP-FKBP25(111~224 aa)均能在HEK 293T細(xì)胞中有效表達(dá);GFP-FKBP25野生型在COS7細(xì)胞中主要分布在細(xì)胞質(zhì)中,細(xì)胞核中表達(dá)較少,而突變體在細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核均有表達(dá),而且細(xì)胞核中的表達(dá)多于野生型。共定位實驗結(jié)果表明:野生型FKBP25蛋白與CLIC1蛋白在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)存在明顯的共定位現(xiàn)象。其3個缺失突變體與CLIC1蛋白的共定位明顯減少,而且共定位也存在區(qū)別:FKBP25-N與CLIC1共定位主要于細(xì)胞核中,部分分布于細(xì)胞質(zhì);FKBP25-PC和FKBP25-C與CLIC1只共定位于細(xì)胞質(zhì)中。結(jié)論熒光共定位實驗觀察到FKBP25野生型及其3種突變體FKBP25(1~42aa)、FKBP25(43~224 aa)、FKBP25(111~224 aa)與CLIC1蛋白存在不同程度的共定位現(xiàn)象,為進(jìn)一步揭示FKBP25的生物學(xué)功能提供了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生物教研室;安徽醫(yī)科大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年基金(編號:81201368)
【分類號】：R3416
【正文快照】： 2016-05-30接收FK506結(jié)合蛋白(FK506 binding proteins,FK-BP)是高度保守的分子伴侶蛋白家族,能與FK506和雷帕霉素(RAPA)結(jié)合[1]。該家族廣泛存在于真核生物中,不同生物之間FKBP的同源性很高,在生物進(jìn)化過程中具有高度的保守性。研究[2]表明該家族成員都具有肽基脯氨酸異構(gòu)酶(

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6 王瀟,沈心亮,應(yīng)蓮芳,蘇彩霞,吳敏,鄭榮梁;基因重組人腫瘤壞死因子-α突變體的構(gòu)建[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;1999年02期

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8 胡忠,彭麗萍,蔡永華;一個黃綠色的水稻細(xì)胞核突變體[J];遺傳學(xué)報;1981年03期

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1 易小平;陳芳遠(yuǎn);盧升安;周開達(dá);;空間環(huán)境誘發(fā)水稻突變體特異親和性研究[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展（上冊）[C];1999年

2 戴新賓;張榮銑;許長成;匡廷云;;水稻葉綠素b減少突變體的光抑制特性研究[A];全國植物光合作用、光生物學(xué)及其相關(guān)的分子生物學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2001年

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7 許曉明;張榮銑;;水稻葉綠素缺乏突變體的吸收光能分配特性[A];中國植物生理學(xué)會全國學(xué)術(shù)年會暨成立40周年慶祝大會學(xué)術(shù)論文摘要匯編[C];2003年

8 林植芳;彭長連;徐信蘭;林桂珠;張景六;;兩個新的水稻缺葉綠素b突變體光合作用的熱穩(wěn)定性[A];中國植物生理學(xué)會第九次全國會議論文摘要匯編[C];2004年

9 魏玉波;梁乃亭;布哈麗且木;;水稻永綠突變體及應(yīng)用價值[A];中國科協(xié)2005年學(xué)術(shù)年會論文集——核科技、核應(yīng)用、核經(jīng)濟(jì)論壇[C];2005年

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3 記者 馮衛(wèi)東;美發(fā)現(xiàn)能控制小鼠胖瘦的基因[N];科技日報;2007年

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2 張子棟;透明顫菌血紅蛋白及其突變體蛋白對芳香族污染物清除作用的實驗研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

3 Syed Noor Muhammad Shah;黃瓜品系9930誘導(dǎo)突變體的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

4 康樂群;家蠶新突變體4齡幼蟲致死基因的定位克隆及功能研究[D];江蘇科技大學(xué);2015年

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7 TAREK MOHAMED AHMED SOLIMAN(羅大力);通過γ-射線輻射處理菊花外植體篩選花色和花型突變體[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

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9 劉逢舉;陸地棉極短纖維突變體的遺傳、精細(xì)定位與表達(dá)譜分析[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

10 王旭;番茄rin突變體胎萌的生理機(jī)制及rin在胎萌中的作用[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

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1 林婷婷;水稻窄葉白化突變體nul1(t)的鑒定與基因定位[D];西南大學(xué);2015年

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3 朱環(huán)環(huán);兩個水稻苗期致死突變體abl25和ygll遺傳分析與基因定位[D];上海師范大學(xué);2015年

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8 張玲;水稻矮化并花發(fā)育異常突變體dwarf and deformed flower 2 (ddf2)的基因定位與候選基因分析[D];西南大學(xué);2015年

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