發(fā)布時(shí)間：2017-12-16 22:17

  本文關(guān)鍵詞：沙眼衣原體包涵體膜蛋白CT813真核表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)

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【摘要】：目的構(gòu)建沙眼衣原體包涵體膜蛋白CT813真核表達(dá)載體并觀察其在Hela細(xì)胞中的表達(dá),為研究其與宿主間的相互作用奠定基礎(chǔ)。方法克隆CT813基因,分別對(duì)CT813與pcDNA3.1/Myc-HisA空質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切,T4連接酶進(jìn)行連接,然后進(jìn)行菌落PCR、酶切及測(cè)序鑒定;將構(gòu)建的重組質(zhì)粒pcDNA3.1/Myc-HisA-CT813轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞后采用Western blot與間接免疫熒光法檢測(cè)目的蛋白表達(dá)。結(jié)果 PCR顯示,擴(kuò)增的目的基因片段約795bp,與預(yù)期相符;經(jīng)NotⅠ與kpnⅠ雙酶切鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建正確,測(cè)定其序列與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)完全一致;Western blot顯示重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化Hela表達(dá)的CT813融合蛋白分子質(zhì)量單位為29.4kd左右;間接免疫熒光法檢測(cè)該蛋白位于細(xì)胞胞漿中,是衣原體分泌性蛋白。結(jié)論成功構(gòu)建了PcDNA3.1/Myc-His A-CT813真核表達(dá)載體并表達(dá)了沙眼衣原體包涵體膜蛋白CT813,對(duì)研究其生物學(xué)功能及與宿主配體間的相互作用具有重要意義。
【作者單位】： 河北北方學(xué)院病原生物學(xué)與免疫研究所臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：河北省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.C2014405041)
【分類號(hào)】：R374.1
【正文快照】： *?**?沙眼衣原體感染是全球的主要公共健康問(wèn)題之一,其感染通常較為隱匿,且病程遷延,因而造成病原體的廣泛傳播。如沙眼衣原體可感染人的生殖系統(tǒng),由于感染者大多無(wú)明顯的癥狀[1],因此難以早期發(fā)現(xiàn),但這種隱形感染隨后可引起一系列生殖道并發(fā)癥和后遺癥[2],嚴(yán)重者可引起女性輸

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本文編號(hào)：1297679