發(fā)布時(shí)間：2017-12-12 10:35

  本文關(guān)鍵詞：基于高通量測序技術(shù)的實(shí)驗(yàn)動物沙門氏菌檢測方法的建立與評價(jià)

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【摘要】：目的建立基于高通量測序技術(shù)的實(shí)驗(yàn)動物沙門氏菌檢測方法,應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)動物沙門氏菌的檢測。方法提取小鼠糞便DNA樣本,分別針對16S r DNA區(qū)域、23S r DNA區(qū)域、16S~23S r DNA IS、23S~5S r DNA IS、gyr B優(yōu)選區(qū)域設(shè)計(jì)通用引物,對各個引物進(jìn)行測試分析,優(yōu)化擴(kuò)增條件并建庫,利用Illumina高通量測序技術(shù)檢測區(qū)分42個樣本中的沙門氏菌,評價(jià)該方法的特異性和穩(wěn)定性。結(jié)果篩選發(fā)現(xiàn)沙門氏菌的菌種分類優(yōu)選區(qū)域?yàn)間yr B基因,gyr B基因引物序列為FP5’-AACCACCGCAATCAGACCTT3’,FP5’-AGCCACGAAACCTTCACYA-3’。對引物進(jìn)行優(yōu)化,確定最佳擴(kuò)增條件及樣品上樣量并正式建庫,通過高通量測序和序列分析能檢測出42個樣品中極微量的沙門氏菌,檢測方法穩(wěn)定,靈敏度高,檢測限可達(dá)0~102的cfu。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)利用高通量測序技術(shù),建立了一套完整檢測實(shí)驗(yàn)動物沙門氏菌的生物體系,能檢測出實(shí)驗(yàn)動物體內(nèi)極微量的沙門氏菌,檢測方法穩(wěn)定性好,靈敏度高,可沿用至其他種類病原微生物的檢測。
【作者單位】： 浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院浙江省實(shí)驗(yàn)動物與安全性研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：浙江省衛(wèi)生高層次人才(2012F30026) 浙江省科技廳院所專項(xiàng)(2016F30001)
【分類號】：R-332
【正文快照】： 。detection system for detection of Salmonella in laboratory animals based on a high-throughput sequencing technology,Thissystem can detect trace amounts of Salmonella in laboratory animals,and this detection method is stable and highlysensitive,which ca

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

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本文編號：1282195