本文關(guān)鍵詞：EB病毒潛伏膜蛋白2B表位特異性兔血清抗體的制備和鑒定

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【摘要】：目的 制備EB病毒(EBV)潛伏膜蛋白2(LMP2)串聯(lián)B表位特異的兔血清多克隆抗體。方法 利用分子克隆技術(shù),將已鑒定的EBV LMP2蛋白的3個(gè)B細(xì)胞表位,即RIEDPPFNSLL,TLNLT和KSLSSTEFIPN,以柔性肽(GS)加以串聯(lián)連接,經(jīng)原核密碼子優(yōu)化后全基因合成,并經(jīng)BamHⅠ和HindⅢ酶切位點(diǎn)克隆至pET32a(+)載體,測(cè)序鑒定正確的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌BL21(DE3),用異丙基硫代-B-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),對(duì)表達(dá)蛋白進(jìn)行SDS-PAGE分析和Western blot鑒定。用鎳螯合親和層析柱(Ni-NTA Agarose)純化表達(dá)產(chǎn)物,與佐劑乳化后皮下多點(diǎn)注射日本大耳白兔,隔周免疫1次,共3次。分別于免疫的0、2、4、6、8周取血,采用ELISA方法檢測(cè)IgG抗體水平,采用Western blot和細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)兔血清抗體的免疫反應(yīng)性和結(jié)合特異性。結(jié)果 EBV LMP2B表位重組蛋白可通過原核表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行表達(dá),純化的表達(dá)蛋白免疫兔可產(chǎn)生特異性IgG抗體,效價(jià)達(dá)1∶30 000。經(jīng)Western blot法和細(xì)胞免疫熒光法鑒定,制備的兔血清抗體可識(shí)別LMP2重組蛋白和LMP2天然蛋白。結(jié)論成功獲得了EBV LMP2串聯(lián)B表位重組蛋白,制備的兔多克隆血清抗體效價(jià)高,特異性強(qiáng),為L(zhǎng)MP2的生物學(xué)和免疫學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 溫州醫(yī)科大學(xué)分子病毒與免疫研究所微生物學(xué)與免疫學(xué)教研室;溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院胃腸外科;
【分類號(hào)】：R373.1
【正文快照】： ***purified protein produced a specific IgG antibody response,and the titer of the specific IgG was as high as 1:30 000.Western blotanalysis and immunofluorescence analysis indicated that the polyclonal antibody specifically recognized recombinant EBV LM

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本文編號(hào)：1264901