發(fā)布時(shí)間：2017-12-08 03:07

  本文關(guān)鍵詞：沙眼衣原體MIP蛋白的原核表達(dá)、純化及免疫學(xué)特性鑒定

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【摘要】：目的采用p GEX-6p載體原核表達(dá)沙眼衣原體(Ct)巨噬細(xì)胞感染增強(qiáng)因子(MIP),進(jìn)一步純化后免疫小鼠,評價(jià)該蛋白作為Ct疫苗候選抗原的可行性。方法聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)從Ct D型基因組擴(kuò)增MIP編碼基因,構(gòu)建p GEX-6p-1/MIP重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化大腸桿菌,IPTG誘導(dǎo)重組菌表達(dá)GST-MIP融合蛋白,Pre Scission蛋白酶切除GST標(biāo)簽后免疫Balb/c小鼠,ELISA法檢測MIP的免疫學(xué)特性。結(jié)果 MIP編碼基因正確插入p GEX-6p-1載體,核苷酸序列與Gen Bank登陸的Ct D型MIP基因完全一致;重組融合蛋白在E.coli中穩(wěn)定高效表達(dá),酶切后純度達(dá)90%以上;MIP蛋白具有良好的免疫原性,誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生高滴度特異性Ig G型抗體,亞型以Ig G2a為主;MIP免疫組小鼠脾淋巴細(xì)胞受MIP蛋白刺激,分泌高水平IFN-γ。結(jié)論重組表達(dá)的Ct MIP蛋白具有良好的免疫原性,能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生高特異性的體液及細(xì)胞免疫應(yīng)答,可進(jìn)一步探討其作為Ct亞單位疫苗的可行性。
【作者單位】： 南華大學(xué)病原生物學(xué)研究所;南華大學(xué)腫瘤研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.81202374和No.81471969) 2015年度湖南省大學(xué)生研究性學(xué)習(xí)和創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目聯(lián)合資助
【分類號】：R374.1
【正文快照】： 沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis,Ct)是一類廣義的胞內(nèi)寄生菌,包括A、B、C、D等19種臨床血清型,大量流行病學(xué)研究證實(shí)Ct血清型D-K與人類泌尿生殖道感染密切相關(guān)。Ct生殖道感染常起病隱匿,且臨床癥狀不典型,因此很容易被忽視或不徹底治療,從而使衣原體能在感染者體內(nèi)持續(xù)存在

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