本文關(guān)鍵詞：華支睪吸蟲Rab2基因的克隆表達(dá)及生物學(xué)特性分析

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【摘要】：目的獲得原核表達(dá)的華支睪吸蟲Rab2蛋白,并探索其生物學(xué)特性。方法從華支睪吸蟲cDNA文庫獲得CsRab2的全長cDNA,NCBI搜索與之相似度高的基因序列,預(yù)測其所含結(jié)構(gòu)域和功能;應(yīng)用Vector NTI程序?qū)碜杂贕en Bank中與之有較高相似度的基因序列進(jìn)行分析,構(gòu)建基因進(jìn)化樹;Swiss-model預(yù)測其三維立體結(jié)構(gòu),原核表達(dá)重組融合蛋白CsRab2,采用Western blot鑒定重組蛋白CsRab2,采用q RT-PCR測定CsRab2基因在不同發(fā)育階段的表達(dá)水平。結(jié)果 CsRab2全長基因的ORF包含588個堿基,編碼195個氨基酸。Prot Param預(yù)測該編碼蛋白的理論分子量和等電點分別是22.29×103 Mr和5.87。不含有信號肽,也未發(fā)現(xiàn)線粒體等亞細(xì)胞定位序列,三維預(yù)測結(jié)果顯示,Rab2同Rab家族的其他蛋白類似:由保守的G結(jié)構(gòu)域和長度、序列上高度可變的N端和C端形成。將純化后的蛋白進(jìn)行SDS-PAGE電泳,考馬斯亮藍(lán)染色觀察該目的蛋白分子量約28×103 Mr。經(jīng)過親和層析方法純化獲得的rCsRab2,可被His tag小鼠單克隆抗體識別。CsRab2在華支睪吸蟲各生活史階段均有表達(dá),且在囊蚴和尾蚴階段表達(dá)較高。結(jié)論 CsRab2屬于保守蛋白,其生物信息學(xué)分析符合Rab家族蛋白的共有特性,在囊蚴和尾蚴階段表達(dá)較高,但CsRab2在細(xì)胞內(nèi)確切的定位信息和功能仍有待進(jìn)一步研究。
【作者單位】： 廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院;中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院;
【基金】：廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院自然科學(xué)研究項目(2014YZ009)
【分類號】：R383.2
【正文快照】： Rab蛋白家族是一類Ras相關(guān)的GTP結(jié)合蛋白,Rab蛋白和下游效應(yīng)蛋白定位在細(xì)胞內(nèi)不同的細(xì)胞器,在細(xì)胞內(nèi)囊泡的形成、囊泡之間的轉(zhuǎn)運以及囊泡與細(xì)胞膜的粘附、錨定和融合等過程中發(fā)揮重要的作用[1]。Rab家族蛋白成員之一—Rab2蛋白的功能被逐步發(fā)現(xiàn):在線蟲的神經(jīng)細(xì)胞中Rab2蛋白參

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