本文關(guān)鍵詞：Apak穩(wěn)定敲除細(xì)胞系的建立及其p53活性和凋亡水平的變化

  更多相關(guān)文章： 慢病毒屬 Apak CRISPR/Cas 敲除 基因 p 質(zhì)粒 凋亡 克隆形成

【摘要】：目的利用CRISPR/Cas9慢病毒系統(tǒng)在人結(jié)腸癌細(xì)胞(HCT116細(xì)胞)中建立穩(wěn)定及永久性Apak敲除細(xì)胞系,檢測(cè)Apak敲除后細(xì)胞部分生物學(xué)活性、p53活性和凋亡水平的變化。方法構(gòu)建lenti CRISPR v2-sgRNA Apak敲除質(zhì)粒,進(jìn)行慢病毒包裝,感染HCT116細(xì)胞,嘌羅霉素篩選出陽性克隆。通過蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(cè)Apak蛋白水平,篩選得到Apak穩(wěn)定敲除細(xì)胞系。分別通過報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)、流式細(xì)胞術(shù)和克隆形成實(shí)驗(yàn)測(cè)定Apak穩(wěn)定敲除細(xì)胞系中p53活性、細(xì)胞凋亡率和克隆形成能力。結(jié)果通過測(cè)序證明lenti CRISPR v2-sgRNA Apak敲除質(zhì)粒正確,蛋白質(zhì)免疫印跡證實(shí)Apak敲除細(xì)胞系中Apak表達(dá)缺失。在Apak敲除細(xì)胞系中p53的轉(zhuǎn)錄活性增強(qiáng),Apak敲除細(xì)胞凋亡增加、克隆形成能力降低。結(jié)論獲得Apak穩(wěn)定敲除細(xì)胞系,便于后期Apak功能的研究。
【作者單位】： 廣東醫(yī)學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所 蛋白質(zhì)組學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 國(guó)家蛋白科學(xué)研究中心(北京);蛋白質(zhì)藥物國(guó)家工程研究心;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31540072,31270799) 國(guó)家科技合作專項(xiàng)資助項(xiàng)目(2014DFB30020) 北京市自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(5142019) 蛋白質(zhì)組學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題(SKLP-O201414)
【分類號(hào)】：R329.2;Q78
【正文快照】： 在細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)領(lǐng)域,對(duì)基因功能的研究主要是如何從分子機(jī)制上反映基因?qū)Ρ硇偷挠绊�。前期主要通過在生物體中進(jìn)行基因沉默或過量表達(dá)來研究基因變化對(duì)表型的影響,但都較復(fù)雜且耗時(shí)。在過去的幾十年中出現(xiàn)了一種新的方法——基因組編輯技術(shù),廣泛應(yīng)用于基因功能的研究,其

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 沈超,鄭從義,李朝陽,屈三甫;離體培養(yǎng)細(xì)胞系冷休克敏感差異性的研究[J];氨基酸和生物資源;2003年04期

2 顏永杉,馮尚,劉連瑞,甄惠欣,馮之凡;大鼠非致瘤四倍體細(xì)胞系的建立及細(xì)胞遺傳學(xué)和酶學(xué)特征[J];遺傳學(xué)報(bào);1987年04期

3 韓嶸,陳偉勝,童英,尚克剛,孟令國(guó);兩個(gè)可進(jìn)入種系的ES細(xì)胞系的建立[J];遺傳學(xué)報(bào);1999年03期

4 ;為再生醫(yī)學(xué)提供高通量細(xì)胞系表征服務(wù)[J];辦公自動(dòng)化;2014年05期

5 張念慈;尹文林;沈錦玉;曹錚;顧志敏;;團(tuán)頭魴尾鰭細(xì)胞系TQ-8801的建立[J];科技通報(bào);1991年02期

6 馬端端，王曉民，，王昕紅，萬有，陳光慧，韓濟(jì)生;GDNF在多種細(xì)胞系中表達(dá)的研究[J];北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1995年04期

7 舒世華;;APUD細(xì)胞系(講座)[J];青海醫(yī)學(xué)院通訊;1979年02期

8 何維,高建剛,劉曉,孫方臻;從C57BL/6J小鼠胚胎中分離ES細(xì)胞系(英文)[J];Developmental & Reproductive Biology;1997年02期

9 毛紅霞;;離心法增強(qiáng)人和非人細(xì)胞系對(duì)丙型肝炎病毒感染的敏感性[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊(cè));2000年03期

10 柴桂萱,韓嶸,尚克剛;C57 BL/6J小鼠ES細(xì)胞系的建立及其特性分析[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;1996年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王官清;;水痘-帶狀皰疹病毒報(bào)告細(xì)胞系的構(gòu)建及應(yīng)用研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第16次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)摘要集[C];2010年

2 張秀軍;;血源細(xì)胞系中P2Y受體的基因表達(dá)[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2005年學(xué)術(shù)大會(huì)、青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

3 徐淑平;何卓培;徐俊;羅士韋;;抗4-氧賴酸煙草細(xì)胞系變異的穩(wěn)定性[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第五次會(huì)議論文摘要匯編[C];1992年

4 楊亮;張瑞軍;魏海明;田志剛;;NK細(xì)胞系IL-2自分泌環(huán)路的驗(yàn)證及意義[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

5 田擁軍;覃莉;張正茂;楊東亮;;穩(wěn)定表達(dá)乙型肝炎病毒G145R變異表面抗原細(xì)胞系的建立與細(xì)胞性質(zhì)的初步鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國(guó)病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

6 戴振鵬;高曉明;;建立人CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞系的免疫生物學(xué)特性[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

7 楊亮;張瑞軍;魏海明;田志剛;;NK細(xì)胞系YT通過分泌IL-2進(jìn)行自身調(diào)節(jié)[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

8 關(guān)衛(wèi)衛(wèi);孫殿興;;多種乙型肝炎病毒突變株可調(diào)控性表達(dá)細(xì)胞系的構(gòu)建[A];第二屆全國(guó)病毒性肝炎慢性化重癥化基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

9 萬瑩華;司維柯;杜業(yè)軍;李招權(quán);潘靜;趙宸;李軍;粟永萍;;輻射對(duì)L929細(xì)胞生長(zhǎng)及CCN1基因表達(dá)的影響[A];第九屆西南三省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2008年

10 王琳;劉文;劉妍;紀(jì)冬;思蘭蘭;鐘彥偉;徐東平;;我國(guó)流行的C基因型HBV穩(wěn)定復(fù)制表達(dá)細(xì)胞系的建立[A];第二屆全國(guó)病毒性肝炎慢性化重癥化基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

本文編號(hào)：1187231