本文關鍵詞：超聲破碎法聯(lián)合應用DTT提取純化Ca_V1.2鈣通道CT3蛋白

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【摘要】：目的探討心肌Ca_V1.2鈣通道CT3蛋白片段提取與純化的方法。方法將CT3的cDNA插入pG EX-6p-3質粒載體后,轉化大腸桿菌BL-21感受態(tài)細胞,大量培養(yǎng)并利用異丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)誘導CT3的GST融合蛋白表達,并采用超聲破碎法進行分離純化,在10mmol/L二硫蘇糖醇(DL-dithiothreitol,DTT)存在的情況下,PreScission蛋白酶切除GST標簽,凝膠電泳鑒定CT3蛋白,檢測蛋白純度和相對分子質量。結果 SDSPAGE結果顯示,超聲破碎法可以純化得到GST-CT3融合蛋白,且單純應用PreScission蛋白酶酶切GST-CT3,得到的CT3蛋白片段濃度較低,而采用PreS cission蛋白酶聯(lián)合應用DTT則可以成功提取純化出濃度較高的CT3蛋白片段。結論超聲破碎法聯(lián)合應用DTT與PreScission蛋白酶能夠提取純化出高濃度和純度的CT3蛋白片段,為深入研究CT3的生物學功能奠定了基礎。
【作者單位】： 中國醫(yī)科大學藥學院藥物毒理學教研室;東北大學機械工程與自動化學院環(huán)境機械研究所;
【基金】：國家自然科學基金(31400981,31471091) 大學生創(chuàng)新計劃項目(2015069,201510159068,201510159047,2015048)
【分類號】：R363
【正文快照】： 鈣離子(calcium,Ca2+)參與機體眾多的生理生化反應,是維持生命活動的重要陽離子,細胞胞漿內(nèi)Ca 2+濃度處于持續(xù)的高水平狀態(tài)與許多疾病狀態(tài)密切相關,例如高血壓、心力衰竭、動脈粥樣硬化、心肌肥厚、心律失常、缺血-再灌注損傷等。心 肌細胞L型電壓依賴性鈣離子通道(L-type vo

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1 宋宇;王文棟;張瑾;;出血性大腸桿菌O157:H7破碎方法的比較[J];遼東學院學報;2006年02期

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本文編號：1184209