本文關(guān)鍵詞：超聲破碎法聯(lián)合應(yīng)用DTT提取純化Ca_V1.2鈣通道CT3蛋白

  更多相關(guān)文章： DTT CT 融合蛋白 提取 純化 超聲破碎法

【摘要】：目的探討心肌Ca_V1.2鈣通道CT3蛋白片段提取與純化的方法。方法將CT3的cDNA插入pG EX-6p-3質(zhì)粒載體后,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL-21感受態(tài)細(xì)胞,大量培養(yǎng)并利用異丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)CT3的GST融合蛋白表達(dá),并采用超聲破碎法進(jìn)行分離純化,在10mmol/L二硫蘇糖醇(DL-dithiothreitol,DTT)存在的情況下,PreScission蛋白酶切除GST標(biāo)簽,凝膠電泳鑒定CT3蛋白,檢測蛋白純度和相對分子質(zhì)量。結(jié)果 SDSPAGE結(jié)果顯示,超聲破碎法可以純化得到GST-CT3融合蛋白,且單純應(yīng)用PreScission蛋白酶酶切GST-CT3,得到的CT3蛋白片段濃度較低,而采用PreS cission蛋白酶聯(lián)合應(yīng)用DTT則可以成功提取純化出濃度較高的CT3蛋白片段。結(jié)論超聲破碎法聯(lián)合應(yīng)用DTT與PreScission蛋白酶能夠提取純化出高濃度和純度的CT3蛋白片段,為深入研究CT3的生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 中國醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥物毒理學(xué)教研室;東北大學(xué)機(jī)械工程與自動化學(xué)院環(huán)境機(jī)械研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31400981,31471091) 大學(xué)生創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目(2015069,201510159068,201510159047,2015048)
【分類號】：R363
【正文快照】： 鈣離子(calcium,Ca2+)參與機(jī)體眾多的生理生化反應(yīng),是維持生命活動的重要陽離子,細(xì)胞胞漿內(nèi)Ca 2+濃度處于持續(xù)的高水平狀態(tài)與許多疾病狀態(tài)密切相關(guān),例如高血壓、心力衰竭、動脈粥樣硬化、心肌肥厚、心律失常、缺血-再灌注損傷等。心 肌細(xì)胞L型電壓依賴性鈣離子通道(L-type vo

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 宋宇;王文棟;張瑾;;出血性大腸桿菌O157:H7破碎方法的比較[J];遼東學(xué)院學(xué)報(bào);2006年02期

2 ;[J];;年期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉四光;李文權(quán);鄭嘯;鄧永智;蔡明剛;梁燕茹;;自養(yǎng)小球藻(Chlorella autotropica)多糖提取純化方法研究[A];中國海洋學(xué)會海洋生物工程2005年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2005年

，

本文編號：1184209