本文關(guān)鍵詞：體外傳代對(duì)版納微型豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞綠色熒光蛋白表達(dá)的影響

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【摘要】：目的通過分離擴(kuò)增版納微型豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)觀察傳代對(duì)慢病毒轉(zhuǎn)染的綠色熒光蛋白(GFP)表達(dá)的影響。方法采集4月齡版納微型豬的骨髓,在DMEM/F12培養(yǎng)液中分離間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs),并根據(jù)其形態(tài)學(xué)、抗原標(biāo)志表達(dá)和分化潛能給予鑒定。MSCs與GFP慢病毒載體共培養(yǎng),熒光顯微鏡觀察GFP的表達(dá),流式細(xì)胞儀檢測(cè)傳代后MSCs GFP表達(dá)率的變化。標(biāo)記后傳代至1、2、3、4代細(xì)胞間比較用非參數(shù)檢驗(yàn)。結(jié)果采用直接培養(yǎng)骨髓,可以分離到高表達(dá)CD13、CD29、CD90、CD105的MSCs,并可誘導(dǎo)分化為脂肪、骨和軟骨細(xì)胞。MSCs與攜帶GFP的慢病毒載體共培養(yǎng)3天即可觀察到GFP的表達(dá),最佳轉(zhuǎn)染復(fù)數(shù)(MOI)值為50,最佳共培養(yǎng)時(shí)間為6 d。傳代后MSCs GFP表達(dá)率呈下降趨勢(shì)[1代轉(zhuǎn)染率(42.3±2.25)%、2代轉(zhuǎn)染率(41.6±2.65)%、3代轉(zhuǎn)染率(41.4±3.75)%和4代轉(zhuǎn)染率(38.2±4.75)%],但傳至4代GFP表達(dá)率的變化差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論采用含有10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)液可以從版納微型豬骨髓中分離到MSCs,GFP慢病毒轉(zhuǎn)染是標(biāo)記MSCs的有效方法,連續(xù)傳代4代不會(huì)顯著影響GFP的表達(dá)。
【作者單位】： 成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院細(xì)胞生物治療中心干細(xì)胞與免疫細(xì)胞生物醫(yī)藥技術(shù)國家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室云南省干細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室;昆明醫(yī)科大學(xué)成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院臨床學(xué)院;成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院特診科;云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;
【基金】：云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(2015FA039)
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 版納微型豬近交系(banna minipig inbred line,BMI)是云南農(nóng)業(yè)大學(xué)曾養(yǎng)志教授領(lǐng)導(dǎo)的科研小組精心培育的大型哺乳類醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,具有遺傳背景清楚、個(gè)體相似度高的特點(diǎn),是十分珍稀的醫(yī)學(xué)科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究模型[1-3],近交系來源的細(xì)胞也是體外實(shí)驗(yàn)研究的珍稀材料。間充質(zhì)干細(xì)胞(mese

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 成文敏;潘偉榮;尹俊芳;黃言;查星琴;肖晶;曾養(yǎng)志;;版納微型豬近交系DLDH基因編碼區(qū)序列擴(kuò)增及生物信息學(xué)分析[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2015年10期

2 龐榮清;何潔;李瑞生;趙晶;朱慧;朱向情;阮光萍;潘興華;;食蟹猴臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離與鑒定[J];中國比較醫(yī)學(xué)雜志;2015年04期

3 龐榮清;何潔;李福兵;趙晶;阮光萍;王桂華;瞿良;李黎;蔡學(xué)敏;潘興華;;一種簡單的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)方法[J];中華細(xì)胞與干細(xì)胞雜志(電子版);2011年02期

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本文編號(hào)：1183768