本文關(guān)鍵詞：輪狀病毒ZTR-68株的遺傳穩(wěn)定性研究

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【摘要】：[研究背景和目的]輪狀病毒自上世紀70年代初發(fā)現(xiàn)以來至今仍然是造成嬰幼兒腹瀉最主要的病原體,每年約50萬嬰幼兒因感染輪狀病毒重癥發(fā)病而死亡。輪狀病毒感染引起的腹瀉沒有特效藥物治療,疫苗接種是最好的辦法。目前使用的疫苗為減毒活疫苗,在疫苗研制中無論減毒活疫苗還是滅活疫苗篩選疫苗制備用毒株是關(guān)鍵性因素之一。疫苗研制和制備中毒株篩選的原則包括了良好的安全性、免疫原性、遺傳穩(wěn)定性和生產(chǎn)適用性。按照一般規(guī)律,致病毒株(野毒株或強毒株)在體外多次傳代后往往會發(fā)生基因的漂移或變異,這種漂移特別是變異一方面會使得強毒株發(fā)生減毒效應,為減毒活疫苗制備篩選毒株；另一方面減毒后的毒株復制能力和免疫原性會有所下降。滅活疫苗的制備需要用于疫苗制備的毒株保持強毒性質(zhì)以保障獲得高產(chǎn)量的病毒和穩(wěn)定的免疫原性。疫苗工作種子毒株是疫苗制備的毒種,其穩(wěn)定性和免疫原性的保持與否至關(guān)重要。此項研究是針對一株源于患輪狀病毒性腹瀉兒童經(jīng)篩選用于輪狀病毒滅活疫苗制備的被命名為ZTR-68(G1[8]型)毒株的體外傳代后遺傳穩(wěn)定性和免疫原性評價。[方法]輪狀病毒ZTR-68株的傳代培養(yǎng)：將的輪狀病毒ZTR-68株第14代(疫苗制備用工作種子毒株),繼續(xù)在Vero細胞上連續(xù)傳代至40代(P40代)。每隔10代用聚丙酰胺凝膠電泳做基因組帶型檢測,RT-PCR測定P14-P40各代輪狀病毒VP4、VP7基因序列。用蝕斑形成單位(PFU)方法檢測了每一傳代代次的PFU,將第P15、P20、P25、P30、P35、P40病毒收獲液免疫動物。動物免疫選用ICR雌性小鼠,進行腹腔注射,免疫兩次,間隔4周,第二次免疫,每次免疫劑量為0.5ml、106PFU/ml,第二次免疫后一周采血,蝕斑減數(shù)中和實驗檢測血清中和抗體效價。實驗組為P15、P20、P25、P30、P35、P40等6組,以及對照組PBS組。[結(jié)果]基因組帶型比較證明,各代次間基因組帶型一致；病毒VP4、VP7基因序列測定未發(fā)現(xiàn)突變；病毒的感染性滴度在P38之前沒有明顯變化,平均感染性滴度在1×106.5PFU/ml左右,P39與P40代感染性滴度有所下降。動物實驗結(jié)果表明,平均中和抗體效價為1：210,各實驗組的幾何均值(GMT)相差不大,經(jīng)方差分析,其差異沒有統(tǒng)計學意義(P0.05)。[結(jié)論]輪狀病毒ZTR-68株在Vero細胞上傳至40代,其基因組帶型性沒有發(fā)生改變,主要抗原基因VP4、VP7基因序列沒有發(fā)生變異,病毒在第38代前保持了良好的復制能力,各代次病毒的免疫原性沒有明顯差異。研究證明,輪狀病毒ZTR-68株傳代后仍保持良好的遺傳穩(wěn)定性和免疫原性,適于輪轉(zhuǎn)病毒滅活疫苗制備之用。
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R373

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