本文關(guān)鍵詞：輪狀病毒ZTR-68株的遺傳穩(wěn)定性研究

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【摘要】：[研究背景和目的]輪狀病毒自上世紀(jì)70年代初發(fā)現(xiàn)以來(lái)至今仍然是造成嬰幼兒腹瀉最主要的病原體,每年約50萬(wàn)嬰幼兒因感染輪狀病毒重癥發(fā)病而死亡。輪狀病毒感染引起的腹瀉沒(méi)有特效藥物治療,疫苗接種是最好的辦法。目前使用的疫苗為減毒活疫苗,在疫苗研制中無(wú)論減毒活疫苗還是滅活疫苗篩選疫苗制備用毒株是關(guān)鍵性因素之一。疫苗研制和制備中毒株篩選的原則包括了良好的安全性、免疫原性、遺傳穩(wěn)定性和生產(chǎn)適用性。按照一般規(guī)律,致病毒株(野毒株或強(qiáng)毒株)在體外多次傳代后往往會(huì)發(fā)生基因的漂移或變異,這種漂移特別是變異一方面會(huì)使得強(qiáng)毒株發(fā)生減毒效應(yīng),為減毒活疫苗制備篩選毒株；另一方面減毒后的毒株復(fù)制能力和免疫原性會(huì)有所下降。滅活疫苗的制備需要用于疫苗制備的毒株保持強(qiáng)毒性質(zhì)以保障獲得高產(chǎn)量的病毒和穩(wěn)定的免疫原性。疫苗工作種子毒株是疫苗制備的毒種,其穩(wěn)定性和免疫原性的保持與否至關(guān)重要。此項(xiàng)研究是針對(duì)一株源于患輪狀病毒性腹瀉兒童經(jīng)篩選用于輪狀病毒滅活疫苗制備的被命名為ZTR-68(G1[8]型)毒株的體外傳代后遺傳穩(wěn)定性和免疫原性評(píng)價(jià)。[方法]輪狀病毒ZTR-68株的傳代培養(yǎng)：將的輪狀病毒ZTR-68株第14代(疫苗制備用工作種子毒株),繼續(xù)在Vero細(xì)胞上連續(xù)傳代至40代(P40代)。每隔10代用聚丙酰胺凝膠電泳做基因組帶型檢測(cè),RT-PCR測(cè)定P14-P40各代輪狀病毒VP4、VP7基因序列。用蝕斑形成單位(PFU)方法檢測(cè)了每一傳代代次的PFU,將第P15、P20、P25、P30、P35、P40病毒收獲液免疫動(dòng)物。動(dòng)物免疫選用ICR雌性小鼠,進(jìn)行腹腔注射,免疫兩次,間隔4周,第二次免疫,每次免疫劑量為0.5ml、106PFU/ml,第二次免疫后一周采血,蝕斑減數(shù)中和實(shí)驗(yàn)檢測(cè)血清中和抗體效價(jià)。實(shí)驗(yàn)組為P15、P20、P25、P30、P35、P40等6組,以及對(duì)照組PBS組。[結(jié)果]基因組帶型比較證明,各代次間基因組帶型一致；病毒VP4、VP7基因序列測(cè)定未發(fā)現(xiàn)突變；病毒的感染性滴度在P38之前沒(méi)有明顯變化,平均感染性滴度在1×106.5PFU/ml左右,P39與P40代感染性滴度有所下降。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,平均中和抗體效價(jià)為1：210,各實(shí)驗(yàn)組的幾何均值(GMT)相差不大,經(jīng)方差分析,其差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。[結(jié)論]輪狀病毒ZTR-68株在Vero細(xì)胞上傳至40代,其基因組帶型性沒(méi)有發(fā)生改變,主要抗原基因VP4、VP7基因序列沒(méi)有發(fā)生變異,病毒在第38代前保持了良好的復(fù)制能力,各代次病毒的免疫原性沒(méi)有明顯差異。研究證明,輪狀病毒ZTR-68株傳代后仍保持良好的遺傳穩(wěn)定性和免疫原性,適于輪轉(zhuǎn)病毒滅活疫苗制備之用。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R373

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本文編號(hào)：1168102