本文關(guān)鍵詞：離體大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型的建立及評價

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【摘要】：目的:建立離體大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型,為細(xì)胞損傷及細(xì)胞凋亡的調(diào)控研究提供基礎(chǔ)。方法:大鼠斷頭處死在無菌條件下開胸取主動脈,經(jīng)組織塊培養(yǎng)法后傳代培養(yǎng)得到充足主動脈內(nèi)皮細(xì)胞,接種于96孔板或爬片培養(yǎng),每組設(shè)6個復(fù)孔,用于之后的各項試驗檢測。以不加H2O2的組作為對照組,以不同濃度的H2O2(100、200、300、400、500μmol/L)作用于內(nèi)皮細(xì)胞相同時間12 h,來篩選最佳作用濃度;依據(jù)結(jié)果以相同濃度的H2O2(100和200μmol/L)分別作用不同時間(3、6、9、12及24 h),來篩選最佳作用時間。通過免疫熒光法鑒定、細(xì)胞存活率檢測、生化指標(biāo)(LDH-L、NO、MDA、SOD)檢測及內(nèi)皮細(xì)胞凋亡指數(shù)等變化,評價及驗證模型的建立。結(jié)果:對細(xì)胞內(nèi)Ⅷ型膠原抗原進(jìn)行免疫熒光染色后鑒定血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)成功;在12 h的相同作用時間下,隨著H2O2濃度的加大,細(xì)胞存活率呈顯著下降(77.63%±5.20%~40.90%±2.10%);相同濃度(100μmol/L組和200μmol/L組)隨著作用時間的增加,細(xì)胞存活率呈顯著遞減(100μmol/L組為86.83%±12.11%~44.26%±5.70%,200μmol/L組為78.28%±11.98%~34.45%±5.87%);以H2O2濃度為100μmol/L作用3、6、9、12及24 h,培養(yǎng)液中生化指標(biāo)在9 h后LDH-L與MDA呈顯著遞增,NO與SOD呈顯著遞減;在H2O2濃度為100μmol/L與作用時間12 h的條件下,流式檢測結(jié)果顯示內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率為16.92%±2.37%,顯著高于對照組2.68%±0.47%(P0.01);TUNEL檢測內(nèi)皮細(xì)胞凋亡指數(shù)為17.65%±2.36%,顯著高于對照組的3.23%±0.57%(P0.01)。結(jié)論:該方法成功建立了體外血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型,探索了輕重適度的誘導(dǎo)細(xì)胞損傷和細(xì)胞凋亡的造模方法,可以成為開展多種血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷及凋亡調(diào)控機(jī)制研究的基礎(chǔ)。
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所;天津體育學(xué)院;空軍后勤部疾病預(yù)防控制中心;
【關(guān)鍵詞】： 大鼠 內(nèi)皮細(xì)胞 氧化應(yīng)激 損傷 凋亡 模型
【基金】：國家自然科學(xué)基金課題(81373108,30971421)
【分類號】：R54;R-332
【正文快照】： 心血管疾病是造成世界范圍內(nèi)致殘和過早死亡的主要原因,血管內(nèi)皮細(xì)胞作為組織與血液循環(huán)之間的關(guān)鍵屏障,是所有心血管疾病的共同作用靶點(diǎn)[1]。研究表明,內(nèi)皮功能受損患者血管疾病事件的發(fā)生率明顯高于無內(nèi)皮功能受損患者[2]。氧化應(yīng)激是心血管內(nèi)皮功能障礙的重要誘因之一,在心

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 董玉蘭,陳鐵鎮(zhèn),王鐵吉,王躍忠,張亞佳;人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)及免疫細(xì)胞化學(xué)研究[J];中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;1990年06期

2 徐德敏,趙基,黃桂秋,張彩英;豬主動脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)[J];臨床與實驗病理學(xué)雜志;1991年02期

3 富路,梅宇,李暉;纖溶酶原激活物抑制劑1反義RNA對豬主動脈內(nèi)皮細(xì)胞中成纖維細(xì)胞生長因子的影響[J];中華病理學(xué)雜志;2001年03期

4 高航;關(guān)春艷;;兔主動脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定:內(nèi)皮細(xì)胞分離方式及培養(yǎng)條件的改良[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2010年11期

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8 陳國強(qiáng);張彤;楊永宗;;內(nèi)毒素刺激豬主動脈內(nèi)皮細(xì)胞有賴于血清成分的參與[J];衡陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1991年03期

9 蔣建剛,陳積雄,王紅,鄧良剛,陳瑞娟,汪道文;內(nèi)外源性EETs對血管內(nèi)皮一氧化氮合酶的表達(dá)及其在Thr-495位磷酸化的作用[J];中國藥理學(xué)通報;2004年04期

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王攀;TLR2對五指山小型豬主動脈內(nèi)皮細(xì)胞炎癥因子表達(dá)的影響[D];山東師范大學(xué);2011年

2 郭海蓮;游離脂肪酸及葡萄糖對大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞的影響及作用機(jī)制[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

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本文編號：1127251