本文關(guān)鍵詞：膽固醇敏感器SCAP功能失調(diào)對THP-1源性巨噬細胞炎癥因子表達的影響

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【摘要】：目的觀察膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白裂解激活蛋白(sterol regulatory element binding proteins cleavage-activating protein,SCAP)功能失調(diào)對THP-1源性巨噬細胞脂質(zhì)代謝及IL-1β、MCP-1表達的影響,探討SCAP的促炎作用是否依賴于其介導(dǎo)的膽固醇穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)功能。方法采用基因轉(zhuǎn)染方法在THP-1源性巨噬細胞中過表達SCAP或沉默SCAP,結(jié)合使用炎癥刺激劑LPS(1μg/m L)或SCAP轉(zhuǎn)位抑制劑Betulin(3μmol/L)處理THP-1源性巨噬細胞,將細胞分為對照組、過表達SCAP組、沉默SCAP組、LPS組、沉默SCAP+LPS組、Betulin組以及過表達SCAP+Betulin組,RT-PCR法檢測過表達SCAP或沉默SCAP對HMGCo AR、pro-IL-1β、MCP-1基因表達水平的影響。油紅O染色觀察不同組別細胞內(nèi)中性脂質(zhì)沉積的變化。酶法定量測定胞內(nèi)膽固醇含量。Western blot法檢測SCAP、pro-IL-1β以及培養(yǎng)上清中IL-1β的蛋白水平。結(jié)果 1過表達SCAP組與對照組比較,其HMGCo AR、MCP-1、proIL-1β基因表達水平升高(P0.01),細胞內(nèi)pro-IL-1β及細胞培養(yǎng)上清中IL-1β蛋白含量均上升(P0.05),且細胞內(nèi)總膽固醇(total cholesterol,TC)及膽固醇酯(cholesterol ester,CE)含量上升(P0.01)。2沉默SCAP組與對照組比較,HMGCo AR、MCP-1、pro-IL-1β基因表達水平下降(P0.05),細胞內(nèi)proIL-1β及培養(yǎng)上清中成熟IL-1β蛋白含量均降低(P0.05),且細胞內(nèi)中性脂質(zhì)蓄積減少,TC及CE含量下降(P0.05);沉默SCAP+LPS組與LPS組比較,MCP-1、pro-IL-1β基因表達下調(diào)(P0.05),成熟IL-1β蛋白水平下降(P0.05)。過表達SCAP+Betulin組與過表達SCAP組比較,HMGCo AR基因表達水平下降(P0.05),其細胞內(nèi),TC及CE含量亦下降(P0.05),但MCP-1、pro-IL-1β基因表達水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),培養(yǎng)上清中成熟IL-1β蛋白含量差異也無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論膽固醇敏感器SCAP功能失調(diào)促進THP-1源性巨噬細胞內(nèi)炎癥因子IL-1β、MCP-1表達,增加成熟IL-1β的生成及其向細胞外分泌;SCAP這一新發(fā)現(xiàn)的功能不依賴于其介導(dǎo)的膽固醇穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)功能。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院腎臟內(nèi)科;重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院心血管內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白裂解激活蛋白 白介素-β 炎癥 脂質(zhì)代謝 巨噬細胞
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金(81500341)~~
【分類號】：R363
【正文快照】： hotmail.com脂代謝紊亂與炎癥是加速動脈粥樣硬化性疾病進展的重要危險因素[1]。膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白裂解激活蛋白(sterol regulatory element binding proteinscleavage-activating protein,SCAP)是調(diào)節(jié)真核細胞脂質(zhì)代謝穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵分子。本課題組前期研究證實,在炎癥、糖

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