本文關(guān)鍵詞：活血益氣方及其拆方對急性心肌梗死模型大鼠miR-126、Spredl表達及血管新生的影響

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【摘要】：治療性血管新生,又稱“藥物促進心臟自身搭橋”,可以有效建立側(cè)枝循環(huán),改善患者的缺血缺氧狀態(tài),減少心肌梗死、預(yù)防或逆轉(zhuǎn)心室重構(gòu),在改善患者心功能及預(yù)后等方面,發(fā)揮著重要作用,為多種缺血性疾病的治療提供了新的思路和廣闊的應(yīng)用前景。 microRNA作為基因調(diào)控的分子“開關(guān)”,在血管生成過程起著重要的調(diào)節(jié)作用,可能調(diào)控了重要的血管生成因子的表達水平。miR-126是心血管疾病中最容易表達的miRNA之一,也是血管內(nèi)皮上的特異性的mi RNA,在缺血性心臟病治療性血管生成中具有關(guān)鍵性作用,開展以miR-126為治療性血管生成作用靶點的研究具有重要意義。目的：以血管內(nèi)皮特異性miR-126為切入點,觀察具有促進血管新生作用的活血益氣方對miR-126及血管新生負性調(diào)節(jié)因子Spredl的影響,進一步闡明miR-126、 Spred1與血管新生之間的關(guān)系,及活血益氣方通過miR-126、Spredl介導(dǎo)缺血性心臟病治療性血管生成的作用機制和配伍規(guī)律。方法：健康雄性SD大鼠行左冠狀動脈前降支結(jié)扎術(shù)制備急性心肌梗死模型,隨機分為模型組、活血益氣方組、益氣方組、活血方組。假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎。連續(xù)給予相應(yīng)藥物4周后,處死大鼠,取梗死邊緣區(qū)心肌組織進行指標檢測。采用免疫組織化學(xué)法檢測成熟血管標記物α-平滑肌肌動蛋白(a-SMA)及內(nèi)皮特異性標記物CD31,并測量梗死邊緣區(qū)微血管平均直徑來觀察各組的血管新生情況；采用實時熒光定量PCR法,觀察miR-126,Spred1、VEGF的mRNA的表達情況；采用Vestern Blot法觀察Spred1、VEGF蛋白的表達情況。結(jié)果：1.以α-SMA檢測梗死邊緣區(qū)心肌組織微血管密度(MVD),模型組MVD高于假手術(shù)組,兩者比較具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01);活血益氣方組、益氣方組、活血方組MVD高于模型組,分別與之比較,僅活血益氣方組、活血方組具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01,P0.05);益氣方組、活血方組MVD均低于活血益氣方組,分別與之比較,均具有統(tǒng)計學(xué)差異(1, P0.05)。2.以CD31檢測梗死邊緣區(qū)心肌組織MVD,模型組MVD高于假手術(shù)組,兩者比較具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01)；活血益氣方組、益氣方組、活血方組MVD高于模型組,與之比較,均具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01)；益氣方組、活血方組MVD均低于活血益氣方組,與之比較,未見統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。3.模型組梗死邊緣區(qū)心肌組織微血管平均直徑(MMVD)顯著小于假手術(shù)組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；活血益氣方組、益氣方組、活血方組MMVD大于模型組,僅活血益氣方組與之比較具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01)；益氣方組、活血方組MMVD小于活血益氣方組,分別與之比較,均具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01)。4.模型組梗死邊緣區(qū)心肌組織、/EGF mRNA表達高于假手術(shù)組,兩者比較未見統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；活血益氣方組、益氣方組、活血方組VEGF mRNA表達高于模型組,僅活血益氣方組、活血方組與之比較具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01)；益氣方組、活血方組、/EGF mRNA表達均低于活血益氣方組,僅益氣組與之比較具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。5.模型組梗死邊緣區(qū)心肌組織VEGF蛋白表達高于假手術(shù)組,兩者比較未見統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；活血益氣方組、益氣方組VEGF蛋白表達雖高于模型組,但與之比較未見統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；益氣方組、活血方組VEGF蛋白表達低于活血益氣方組,與之比較,均未見統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。6.模型組梗死邊緣區(qū)心肌組織Spredl mRNA表達高于假手術(shù)組,兩者比較具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；活血益氣方組、益氣方組、活血方組Spredl mRNA表達高于模型組,與之比較,均具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01或P0.05)；益氣方組、活血方組Spredl mRNA表達均高于活血益氣方組,僅活血方組與之比較具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01)。7.模型組梗死邊緣區(qū)心肌組織Spred1表達高于假手術(shù)組,兩者比較未見統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；活血益氣方組、益氣方組、活血方組Spred1表達均低于模型組,與之比較,具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；益氣方組Spredl表達低于活血益氣方組,活血方組Spred1表達高于活血益氣方組,分別與之比較,均未見統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。8.模型組梗死邊緣區(qū)心肌組織miR-126表達低于假手術(shù)組,兩者比較具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01)：活血益氣方組、益氣方組、活血方組miR-126表達低于模型組,分別與之比較,具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01或P0.05)；益氣方組、活血方組miR-126表達均高于活血益氣方組,僅益氣方組與之比較具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01)。結(jié)論：活血益氣方及其拆方具有不同程度促進心肌梗死模型大鼠梗死邊緣區(qū)血管新生的作用,以活血益氣方作用最為顯著,益氣方、活血方在其中起協(xié)同作用。其作用機制可能與下調(diào)miR-126的表達水平,減輕miR-126對VEGF的抑制作用,直接或間接上調(diào)VEGF mRNA的表達,進而促進VEGF的表達；下調(diào)Spred1而上調(diào)其mRNA的表達有關(guān)。Spred1 mRNA上調(diào)情況下,Spred1表達降低,提示Spred1 mRNA可能存在其它的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)因子,其機體作用機制尚需進一步研究。
【關(guān)鍵詞】：活血益氣方 miR-126 Spred1 VEGF 心肌梗死 血管新生
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R285.5;R-332
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-11
• 英文縮略詞11-12
• 第一部分 文獻綜述12-23
• 一、miRNA與缺血性心臟病血管新生12-18
• 1 調(diào)控miRNA以治療缺血性心臟病的策略概述12-13
• 2 缺血性心臟病差異表達的miRNA13
• 3 缺血性心臟病血管新生相關(guān)microRNAs的作用及機制13-17
• 4 應(yīng)用與展望17-18
• 參考文獻18-23
• 第二部分 理論研究23-33
• 一、冠心病基本病機探討23-29
• 1 結(jié)合古代醫(yī)籍及現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認識冠心病23-27
• 2 氣虛血瘀符合基本病機的特點27-29
• 3 結(jié)論29
• 參考文獻29-33
• 第三部分 實驗研究33-79
• 前言33-35
• 一、大鼠急性心肌梗死動物模型的復(fù)制35-41
• 1 材料與方法35-36
• 2 結(jié)果36-37
• 3 討論37-38
• 參考文獻38-41
• 二、活血益氣方及其拆方對急性心梗模型大鼠血管新生的影響41-53
• 1 材料與方法41-45
• 2 結(jié)果45-50
• 3 討論50-51
• 參考文獻51-53
• 三、活血益氣方及其拆方對心梗模型大鼠梗死邊緣區(qū)VEGF及其mRNA表達的影響53-63
• 1 材料與方法53-58
• 2 結(jié)果58-60
• 3 討論60-62
• 參考文獻62-63
• 四、活血益氣方及其拆方對心梗模型大鼠梗死邊緣區(qū)Spred1及其mRNA表達的影響63-73
• 1 材料與方法63-68
• 2 結(jié)果68-70
• 3 討論70-71
• 參考文獻71-73
• 五、活血益氣方及其拆方對心梗模型大鼠梗死邊緣區(qū)miR-126表達的影響73-79
• 1 材料與方法73-75
• 2 結(jié)果75-76
• 3 討論76-77
• 參考文獻77-79
• 結(jié)語79-80
• 致謝80-81
• 在學(xué)期間主要研究成果81-82
• 個人簡歷82

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本文編號：1103537